论文部分内容阅读
目的本研究通过将NGF基因修饰的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)移植到血管性痴呆(Vascular Dementia,VaD)大鼠的体内,并从行为学及其他角度观察其对VaD大鼠的作用。方法体外分离、扩增大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并以重组腺病毒在体外介导神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)和/或绿色荧光蛋白(GreenFluorescent Protein,GFP)基因转染BMSCs。并以Western印记法检测经NGF基因修饰的BMSCs的NGF蛋白表达变化。应用大鼠双侧颈动脉结扎法制备血管性痴呆模型。将大鼠随机分为4组:假手术组:仅暴露双侧颈总动脉,但不结扎,不进行尾静脉注射;PBS对照组:血管性痴呆模型制备后1周尾静脉注射1ml PBS;BMSCs组:造模后1周尾静脉注射4×10~6/ml仅经GFP基因修饰的BMSCs1ml;NGF基因修饰组:造模1周后尾静脉注射4×10~6ml NGF基因修饰的BMSCs1ml。注射后4周Morris水迷宫实验观察其行为学改变,HE染色观察海马区神经细胞形态学改变,TUNEL法检测海马凋亡细胞,以免疫组织化学技术观测大鼠海马神经细胞N-甲基D-天冬氨酸受体-1(N-methyl-D-aspartate Receptor 1,NMDAR1)、NGF、及突触素(Synaptophysin,SYN)的表达变化。结果1、造模4w后,经冰冻切片观察到NGF基因修饰组及BMSCs组大鼠海马区有绿色荧光表达,证明经鼠尾静脉移植BMSCs成功。2、MORRIS水迷宫检测显示实验的第2-5天NGF基因修饰组及BMSC组逃避潜伏期较PBS组均显著缩短(P＜0.05),且NGF基因修饰组优于BMSC组(P＜0.05);第6天的空间探索实验显示:NGF基因修饰组及BMSC组穿越平台位置的次数较PBS组显著增多(P＜0.05),且NGF基因修饰组多于BMSC组(P＜0.05)。3、HE染色:光学显微镜下观察可见PBS组大鼠海马区神经元数目明显减少,组织结构紊乱,可见大量的细胞坏死,细胞结构不清:胞核溶解明显;胞浆淡染;胞体明显肿胀。BMSC组和NGF基因修饰组改变较PBS组明显减轻,而且以NGF基因修饰组减轻更为明显。假手术组未见明显变化。4、TUNEL法检测显示NGF基因修饰组及BMSC组海马凋亡细胞比例均较PBS组显著降低(P＜0.05),且NGF基因修饰组较BMSC组降低更为显著(P＜0.05)。5、NGF基因修饰组及BMSC组大鼠海马区NMDARl表达较PBS组显著降低(P＜0.05),且NGF基因修饰组较BMSC组降低更为显著(P＜0.05)。6、NGF基因修饰组及BMSC组大鼠海马区SYN表达较PBS组显著增高(P＜0.05),且NGF基因修饰组较BMSC组增高更为显著(P＜0.05)。7、NGF基因修饰组及BMSC组大鼠海马区NGF表达较PBS组显著增高(P＜0.05),且NGF基因修饰组较BMSC组增高更为显著(P＜0.05)。8、Western印记法显示:NGF基因修饰的BMSCs的NGF蛋白表达较未经NGF基因修饰的BMSC增高。结论1、静脉移植NGF基因修饰的BMSCs对VaD大鼠的学习记忆能力有一定的改善作用。2、静脉移植NGF基因修饰的BMSCs可以降低VaD大鼠海马区凋亡细胞的比例,对VaD大鼠海马细胞有一定的保护作用。3、NGF基因的修饰可使BMSCs的NGF蛋白表达增高。4、静脉移植NGF基因修饰的BMSCs可以使VaD大鼠海马区SYN表达增加。5、静脉移植NGF基因修饰的BMSCs可以降低VaD大鼠海马区NR1表达。6、静脉移植NGF基因修饰的BMSCs可以提高VaD大鼠海马区NGF的表达。7、NGF基因修饰的BMSCs对VaD大鼠的治疗效果优于单纯的BMSC治疗。