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梅花鹿是一个天然的“中药材宝库”,其中,鹿血在补虚、补血、益精、健胃等方面具有显著的功效,而血清白蛋白是鹿血浆中含量最多的蛋白质,在鹿血的功效成分中占有重要的地位。但是,在NCBI、GenBank等一系列的国际知名数据库中,尚未有完整的梅花鹿血清白蛋白基因序列或完整的蛋白质序列。本课题以新鲜的梅花鹿肝脏为实验原料,首次克隆出梅花鹿血清白蛋白的全基因序列,并对血清白蛋白源活性肽促进细胞增殖及抑制肠道炎症方面进行初步的功效探索。首先,进行梅花鹿血清白蛋白的基因克隆及蛋白质翻译。选择11月龄健康雄性梅花鹿作为实验材料,通过麻醉注射无痛苦处死梅花鹿之后,迅速提取肝脏细胞并通过Trizol裂解提取总RNA,应用CLUSTW、Premier Primer 5.0软件设计的引物依次进行RT-PCR、PCR、TA克隆以及基因测序实验,获得2019 bP的血清白蛋白基因序列,并将该基因翻译成蛋白质序列。第二,应用生物信息学软件AQS系统对翻译后的蛋白质序列进行模拟消化、酶解获得系列肽分子,并进行功能比对分析,预测出15种具有活性功能的短肽分子,然后通过化学合成的方法获得梅花鹿血清白蛋白目标活性肽第三,进行目标活性肽体外功效试验。首先考察15种目标活性肽促进3T3小鼠成纤维细胞增殖的功效,实验结果显示细胞培养48 h后,标号为1、2、3号目标短肽的细胞增殖率分别为22%、29%、30%,具有一定的促增殖功效。然后将筛选出的三种肽分别制备1、0.1、0.01、0.001及0.0001 mg/mL的五个浓度梯度的溶液,分别进行24 h、48 h的3T3细胞培养。实验结果表明,此活性肽促进细胞增殖的作用具有浓度依赖性。实验结果显示细胞培养48h后,活性肽浓度为0.1 mg/mL时,1、2、3号活性肽细胞增殖率相对较高,分别为25%、30%、26%。证明预测的15种活性肽中,1、2、3号活性肽具有一定的促3T3细胞增殖作用,且最适浓度为0.1 mg/mL。第四,把体外试验筛选出的三种活性肽进行体内抑制肠道炎症的功效实验。将1、2、3号活性肽、PBS及HS-6活性肽分别作为实验组、阴性对照组及阳性对照组,对DSS模型小鼠进行灌胃处理。结果显示该活性肽组小鼠的便血、体重、肠道组织状况等临床症状与阳性对照组小鼠相近,明显优于PBS组小鼠,证明梅花鹿血清白蛋白活性肽具有抑制肠道炎症的显著作用。