β-榄香烯对卵巢癌细胞耐药株A2780/PTX的逆转作用研究

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目的:研究β-榄香烯对人卵巢癌细胞株A2780及其耐药细胞株A2780/PTX的抑制、增敏及逆转耐药性作用,探讨其可能的作用机制。方法:本实验采用人卵巢癌细胞株A2780及其耐药细胞株A2780/PTX为研究对象,实验组用含不同浓度(1.25ug/ml、2.5ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml、160ug/ml、320ug/ml、640ug/ml)β-榄香烯DMEM_H培养液进行培养,采用MTT法测定不同浓度β-榄香烯对其的生长抑制率;以不同浓度的紫杉醇(0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、8ng/ml、16ng/ml、32ng/ml、64ng/ml、128ng/ml、256ng/ml),单独或联合低毒性剂量的β-榄香烯(30ug/ml)作用人卵巢癌细胞株A2780及其耐药细胞株A2780/PTX,MTT法检测β-榄香烯对A2780/PTX细胞的增敏作用;β-榄香烯、PTX单独及联合作用A2780/PTX细胞,流式细胞仪检测对其A2780/PTX细胞周期的影响;Western-blot法检测50ug/ml β-榄香烯、10ng/ml PTX及联合用药作用A2780/PTX细胞后P-gp、XIAP和survivin基因表达情况。结果:1、不同浓度的β-榄香烯作用人卵巢癌细胞株A2780及其耐药细胞株A2780/PTX,可抑制卵巢癌细胞A2780及耐药株的生长, IC50分别为76.96ug/ml(A278024h)、100.7ug/ml(A2780/PTX24h)、53.06ug/ml(A278048h)及57.27ug/ml(A2780/PTX48h)。2、不同浓度的紫杉醇单独或联合低毒性剂量的β-榄香烯(30ug/ml)作用人卵巢癌细胞株A2780及其耐药细胞株A2780/PTX,其IC50值分别为6.027ng/ml(A2780+PTX),2.72ng/ml(A2780+PTX+ELE),44.98ng/ml(A2780/PTX+PTX)及10.25ng/ml(A2780/PTX+PTX+ELE)。PTX单独作用时,耐药细胞株IC50值是敏感株的7.46倍,而当联合β-榄香烯用药时,耐药细胞株IC50值是敏感株的3.77倍,下降了一倍;敏感株单独用药的IC50值是联合用药时的2.22倍,而耐药株单独用药的IC50值是联合用药时的4.39倍。3、(20ug/ml、50ug/ml)β-榄香烯、(5ng/ml、10ng/ml)PTX单独给药均能使A2780/PTX细胞G2/M期比例显著升高,并与相应药物剂量呈正相关;而β-榄香烯及PTX联合用药则显著使细胞累积在G2/M期。4、50ug/mlβ-榄香烯单独或联合10ng/ml PTX用药均可明显下调A2780/PTX细胞P-gp、XIAP和survivin的表达,而PTX单独用药时则基本无变化。结论:1、β-榄香烯乳对人卵巢癌细胞株A2780及其耐药细胞株A2780/PTX的增殖有明显的抑制作用,其抑制作用有剂量及时间依赖性。2、β-榄香烯乳在低细胞毒性浓度下对PTX作用的A2780细胞及耐药株细胞A2780/PTX均有不同程度的增敏作用,并且对耐药株的作用更强,可显著逆转PTX的多药耐药性。3、β-榄香烯、PTX单独或联合用药均可使细胞阻滞在G2/M期,二种药物联合使用有正协同作用,诱导细胞更多累积在G2/M期。4、β-榄香烯单独或联合PTX用药均可明显下调P-gp、XIAP和survivin的表达,β-榄香烯对PTX抗肿瘤细胞的增敏及逆转耐药性机制可能是降低耐药相关基因P-gp、XIAP和survivin的表达。
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