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背景:肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,病死率高、五年生存率低。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)将肺癌按病理类型分为非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(Small Cell Lung Cancer,SCLC)。肺癌的形成原因十分复杂,其中吸烟与肺癌尤其是NSCLC有直接关系。尼古丁为香烟中最主要生物碱,虽然目前研究表明尼古丁没有直接致癌作用,但却具有促进肿瘤细胞增殖加快肿瘤生长的作用。3-磷酸肌醇激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)家族成员是肌醇与磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol,PI)的重要激酶。活化的PI3K引起Akt构象的改变,并且磷酸化Akt蛋白,致其活化。Akt磷酸化后能够通过激活或抑制其下游靶蛋白Bad、Caspase 9、NF-kappa B、Forkhead、m TOR等,经多条途径促进细胞存活。PI3K/Akt信号通路在对多种细胞的增殖和存活起着重要作用,已有研究显示许多肿瘤中都存在PI3K/Akt信号通路的过度活化。本研究的基本思路是观察尼古丁对不同病理来源NSCLCs作用差异,检测PI3K/Akt通路基因表达变化,探求尼古丁对不同病理来源NSCLCs作用产生差异的可能机制,为建立针对不同病理类型NSCLCs治疗方法提供理论基础。目的:探讨尼古丁对不同病理来源NSCLCs作用差异和可能机制,为建立寻找针对不同病理类型NSCLCs治疗提供理论依据。方法:分别利用CCK-8细胞毒性试剂盒及流式细胞术检测尼古丁对人肺腺癌细胞NCI-H1975和人大细胞肺癌细胞NCI-H460的促进增殖和抑制凋亡作用。利用Western blot和RT-PCR技术检测尼古丁作用后NCI-H1975和NCI-H460细胞PI3K/Akt通路关键基因m RNA及蛋白表达的改变,建立尼古丁对不同病理类型NSCLCs细胞作用产生差异的分子机制。结果:1、CCK-8检测结果显示尼古丁对NCI-H1975、NCI-H460细胞均有促进增殖的作用,与对照组具有统计学意义(P<0.05),具有时间依赖性(NCI-H1975,y=102.5e0.056x,R2=0.982;NCI-H460,y=102.5e0.056x,R2=0.976)及剂量依赖性(NCI-H1975,y=11.72ln(X)+100.4,R2=0.994;NCI-H460,y=10.90ln(x)+99.68,R2=0.996),但NCI-H1975对尼古丁反应更迅速,更敏感,变化更大。2、流式细胞术检测结果显示尼古丁能显著降低顺铂导致的NCI-H1975、NCI-H460细胞凋亡(P<0.05),具有时间依赖性(NCI-H1975,y=66.48x0.84,R2=0.979;NCI-H460,y=63.98x0.84,R2=0.985),但NCI-H1975对尼古丁反应更迅速,更敏感,变化更大。3、Western blot及RT-PCR检测结果显示尼古丁干预后随尼古丁浓度增大NCI-H1975细胞PI3K m RNA表达增加、Bad/Caspase 9/Fox O3a/m TOR m RNA表达下降,随尼古丁浓度增大NCI-H1975细胞PI3K/p-Akt/p-Bad/p-Caspase9/p-Fox O3a/p-m TOR蛋白表达增加、Bad/Fox O3a/m TOR表达下降;随尼古丁作用时间增加NCI-H1975细胞PI3K m RNA表达增加、Bad/Fox O3a/m TOR m RNA表达下降,随尼古丁作用时间增加NCI-H1975细胞PI3K蛋白表达增加、Bad/Caspase9/Fox O3a/m TOR表达下降。尼古丁干预后随尼古丁浓度增大NCI-H460细胞PI3K m RNA表达增加、Bad/Fox O3a/m TOR m RNA表达下降,随尼古丁浓度增大NCI-H460细胞PI3K/p-Akt/p-Bad/p-m TOR蛋白表达增加、Bad/Fox O3a/m TOR表达下降;随尼古丁作用时间增加NCI-H460细胞PI3K m RNA表达增加、Bad/Fox O3a/m TOR m RNA表达下降,随尼古丁作用时间增加NCI-H460细胞PI3K蛋白表达增加、Bad/Fox O3a/m TOR表达下降。4、尼古丁对NCI-H1975、NCI-H460细胞Caspase 9和Fox O3a两蛋白作用出现差异。结论:1、尼古丁对NCI-H1975、NCI-H460细胞有促进增殖和抑制凋亡作用,且作用具有剂量依赖性和时间依赖性。2、NCI-H1975和NCI-H460细胞对尼古丁反应不同。3、尼古丁可能通过调节PI3K/Akt通路下游Bad、Caspase 9、Fox O3a、m TOR基因表达水平及磷酸化水平来调节NCI-H1975和NCI-H460细胞增殖与凋亡。。4、NCI-H1975和NCI-H460细胞对尼古丁的反应不同,具体表现在Caspase 9和Fox O3a的表达水平变化不同,这可能由于两细胞对尼古丁反应后激活信号通路不同所致。