论文部分内容阅读
研究目的以往的研究发现神经损伤和炎症诱导的DRG和脊髓背角DNA甲基化和组蛋白乙酰化,即所谓的表观遗传学,通过调控相关基因的转录,在病理性痛的发生和发展过程发挥重要作用。聚ADP-核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)是广泛存在于真核细胞内的一组酶蛋白,其通过对相关核蛋白聚ADP-核糖基化的修饰参与基因转录水平的调控。但迄今PARP在神经病理性痛中的作用及表达变化仍不清楚。本研究首先通过鞘内注射PARP抑制剂以观察PARP激活在大鼠腰5脊神经结扎(Lumbar 5 spinal nerve ligation,L5 SNL)引起的神经病理性痛中的作用,而后利用Western Blot法进一步观察大鼠L5 SNL后不同时间脊髓背角PARP-1的表达变化。研究方法本实验采用由郑州大学动物实验中心提供的体重在200-300g之间的雄性Sprague-Dawley大鼠。通过腰五脊神经结扎(L5 SNL)制备神经病理性痛模型,假手术组仅暴露腰5脊神经后关闭切口。采用预先鞘内置管微量注射PARP抑制剂PJ34,对照组注射等体积的溶剂。通过测定大鼠机械刺激撤足阈值(Paw withdrawal threshold,PWT)和热刺激撤足潜伏期(Paw withdrawal latency,PWL)评价PJ34对大鼠痛行为的影响。大鼠痛行为学测试实验分6组:(1)sham组;(2)L5 SNL+saline组;(3)L5 SNL+PJ34 1μg组;(4)L5 SNL+PJ34 5μg;(5)L5 SNL+PJ34 10μg;(6)sham+PJ34 10μg。鞘内注射PJ34或saline于鞘内置管后,SNL之前开始,每天1次,共7天。为了观察PJ34对已经建立起的神经病理性痛的影响,鞘内注射药物于L5 SNL后第7天开始,每天1次,共3天,实验设两组:(1)L5 SNL+saline组;(2)L5 SNL+PJ34 10μg组。为观察大鼠L5 SNL后脊髓背角PARP-1的表达变化,将18只SD大鼠随机分为六组,每组三只,sham组行假手术,其余各组分别于SNL术后1、5、7、10、14天取材,取左侧脊髓腰膨大处,测蛋白浓度,用western blot测PARP-1的表达。研究结果1大鼠L5 SNL后脊髓背角PARP-1的表达变化PARP-1为PARP家族的主要活性形式,本研究通过Western Blot法观察了L5 SNL后第1、5、7、10、14天脊髓背角PARP-1的蛋白表达变化,结果发现L5 SNL能引起脊髓PARP-1蛋白的表达上调,与假手术组比较,显著性差异出现于术后第1天(P<0.05),第7天达高峰(P<0.01),至术后的第14天,仍维持表达。这与L5 SNL后的痛觉变化规律是一致的。2预先鞘内注射(Introthecal injection,i.t.)PARP抑制剂PJ34对L5 SNL后大鼠神经病理性痛形成过程的影响大鼠L5 SNL后PWT和PWL明显下降,与假手术组以及baseline比较比较,显著性差异出现于术后第1天(P<0.05),术后第7天达最低值(P<0.001);预先鞘内注射PJ34能预防L5 SNL后大鼠PWT和PWL的下降,与鞘内注射溶剂组比较,显著性差异出现在PJ34应用后的第3天(P<0.05),并且,测试持续至L5 SNL后的第14天依旧有效,PJ34的作用呈剂量依赖性。单独鞘内注射PJ34对正常大鼠基础PWT和PWL没有影响。3鞘内注射PJ34对L5 SNL后已经建立起的神经病理性痛的影响为观察PARP抑制剂PJ34对已经建立起的神经病理性痛的影响,实验选择L5 SNL后第7天开始鞘内注射PJ34,每天1次,持续3天,结果发现PJ34能部分逆转L5 SNL引起的PWT和PWL的下降。与注射saline组比较,显著性差异出现在用药后的第1天(P<0.05),停止注药后测试,依旧有效。研究结论大鼠L5 SNL可引起脊髓背角PARP-1表达升高,PARP抑制剂PJ34能显著减轻L5 SNL引起的神经病理性痛。