研究发现,中药材植物的连作造成药材品质变劣、产量下降,如太子参、三七、地黄等。前人研究发现植物根际存在着许多具有群体效应(Quorum sensing)的微生物,本实验以连作太子参根际土壤细菌为研究对象,从群体感应角度来研究太子参根际细菌对太子参的影响,主要开展了以下几项研究:1、平板画平行线法筛选群体感应产生菌基于紫色杆菌显紫色原理,采用平板画平行线法筛选群体感应产生菌,结果如下:对照组(CK)5株,正茬(T1)12株,重茬(T2)15株,利用16SrDNA基因对产生的细菌进行分子鉴定,结果显示群体感应产生菌主要为沙雷氏菌属(Seerratia)细菌。2、利用96孔液体培养法筛选群体感应猝灭菌基于紫色杆菌显紫色原理,利用96孔液体培养法筛选群体感应猝灭菌,结果如下:对照组(CK)5株,正茬(T1)1株,重茬(T2)8株。通过16SrDNA对细菌进行分子鉴定,结果表明T144菌株属于芽孢杆菌属(Bacillus thuringiensis);T232菌株属于假单胞菌属(Pseudomonas genicuvata),其他群体感应猝灭菌均属于沙雷氏菌属(Serratia)。3、太子参组培苗体系构建及太子参根际群体感应菌对太子参生长的影响对药用植物太子参组织培养体系进行构建,根据太子参不同生长阶段所需的营养条件不同,对激素种类、浓度配比等条件进行优化。结果表明:NAA(萘乙酸)0.05mgL+ZT(玉米素)3.0mg/L+MS为最佳的初代培养基,NAA(萘乙酸)0.05mg/L+6-BA(氨基嘌呤)2.5mg/L+MS为最佳继代培养基。分别将群体感应产生菌SerratiaT246和群体感应猝灭菌Bacillus thuringiensis T144接种在太子参组培苗上,结果发现Serratia T246菌可将太子参组培苗致死,说明Serratia T246对于太子参是致害菌。稀释后的Bacillus thuringiensis T144对太子参组培苗无明显的影响。将稀释10倍的Seerratia T246和Bacillus thuringiensisT144菌分别按1:1、2:3、7:3比例接种到太子组培苗上,培养一段时间,组培苗无明显病态。4、太子参根际群体感应产生菌荧光蛋白工程菌的构建利用分子生物学的方法,将氯霉素抗性基因插入到质粒pPBUD的amp位点上,获得重组质粒pPBUD-cat。然后,将绿色荧光蛋白基因构建到质粒pPBUD-cat的多隆位点上,获得重组质粒pPBUD-cat-gfp。将重组质粒pPBUD-cat-gfp通过电转转入Serratia T246菌体中,通过氯霉素抗性条件筛选和荧光显微镜观察,获得荧光强度较好的、生理生化条件几乎没发生改变的SerratiaT246菌体。预期通过SerratiaT246-GFP实时、原位观察该菌在太子参体内或根际的定殖、分布及其与宿主植物表现出来的互生、共生和致病性关系。