用RNAi及芯片技术对肝癌细胞中DNMT3B下游基因的初步鉴定

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目的:探索DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)在肿瘤发生中的作用。探查DNMT3 B在人正常肝细胞株、肝癌癌旁及肝癌细胞株中的蛋白表达水平,然后在肝癌细胞系中通过载体介导的RNA干扰抑制DNMT3B的表达,分析与鉴定DNMT3B下游基因表达谱。 方法:用Western blotting及细胞免疫化学分析:DNMT3 B蛋白在人正常肝细胞株、肝癌癌旁及肝癌细胞株的表达。RNAi重组载体pSL/PER-EGFP-MT3B转染肝癌细胞株SMMC-7721。通过RT-PCR及Western blotting方法鉴定DNMT3B的抑制效率。用cDNA基因芯片分析基因表达谱。 结果:DNMT3B在肝癌细胞株中的表达水平明显高于肝癌癌旁和正常肝细胞株。通过RNAi,DNMT3B在肝癌细胞系中的表达被抑制,RNA干扰的抑制效率>80﹪。当DNMT3B表达抑制后,有115条基因表达上调,26条基因表达下调,其中包括一些重要的发育相关基因以及肿瘤相关基因,比如.SNCG、NOTCH、MBD3、WNTll、MAOA、FACL4等。 结论:DNMT3 B在肝癌细胞株中表达水平显著高于正常肝细胞株以及癌旁细胞株。在肝癌细胞系中,RNA干扰能有效的抑制DNMT3B的表达。 在DNMT3B经过RNAi后,表达水平改变了的基因可能是DNMT3B调控的下游基因,DNMT3B或许是通过甲基化的作用对这些基因的表达起到了重要的调控作用。因此,DNMT3B可能是通过对下游基因甲基化作用的调控来控制下游基因的表达,并通过这些下游基因在肿瘤的发生发展中扮演一个重要的角色。
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