异色瓢虫Harmonia axyridis脑内5-HT及其合成酶TPH的免疫组织化学定位研究

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运用树脂石蜡组织包埋切片技术,结合免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶双染法,采用兔抗5-HT抗血清和鼠抗TPH单克隆抗体,初步构建了异色瓢虫Harmoniaaxyridis(鞘翅目,瓢虫科)视觉系统、脑中部及咽下神经节5-HT及其合成酶TPH抗原系统的免疫组织化学反应模式。异色瓢虫脑结构相对比较特殊:视叶发达,具内髓板,视突结构复杂;嗅叶不发达,蕈形体冠缺失,根叶相对简单;中央复合体结构明显。免疫组化结果显示,异色瓢虫脑系统呈强5-HT免疫反应,表现为稳定的反应模式;其脑系统对鼠抗TPH单克隆抗体同样呈显著的免疫阳性反应,且反应模式与5-HT一致。5-HT能神经元多为切向神经元,数目相对较少,呈两侧对称分布,主要位于视叶与侧前脑之间、前脑背方及咽下神经节处,其阳性纤维呈明显的静脉曲张状,投射区域较广泛。几乎所有髓区都具有5-HT阳性纤维的分布,呈深棕色,以神经节层及咽下神经节反应最为显著。各髓区的TPH阳性纤维相对较少,髓区呈淡蓝色。TPH阳性神经元的类型、数目、分布位置、投射区域与5-HT基本相同。5-HT/TPH阳性神经元在视觉系统主要分布于视叶与侧前脑之间,每侧大约有35个,其轴突及分枝或下行进入视叶或上行进入前脑。5-HT/TPH阳性神经元在前脑分布于前脑背方、肯氏细胞两侧,大约有25个,轴突主要投射到蕈形体和中央复合体的广泛区域,另有个别神经元轴突下行投射进入视叶形成广泛分枝。而中脑仅在嗅叶背侧分布有1个大型5-HT/TPH阳性神经元,其轴突进入嗅叶后发生广泛的分枝支配每一嗅觉纤维球。咽下神经节处5-HT/TPH阳性神经元数目相对较多,每侧大约有15个,主要分布于髓区侧细胞体层和腹侧细胞体层,轴突投射进入咽下神经节。结果表明,5-HT作为经典的神经递质在昆虫的视觉信息处理过程中发挥着重要的调节作用,且主要通过远距离的广域神经调节模式来控制昆虫的昼夜节律行为,并在特定区域和GABA协同起作用;昆虫视觉系统中5-HT的含量还可能与其明暗适应的生理调节方式密切相关。此外,异色瓢虫在冠缺失的情况下,可能通过蕈形体叶兼具行使嗅觉和视觉信息接收功能,从而可以同时对嗅觉和视觉信息进行加工处理并做出响应的指令。异色瓢虫脑系统被鼠抗TPH单克隆抗体所标记,表明在该种昆虫脑内极有可能存在着与脊椎动物同源的特异TPH,控制中枢神经系统5-HT产物的生成;同时也揭示了在芳香氨基酸羟化酶基因家族进化过程中,第二次基因重复即TPH与PAH功能的分化至少应该发生在节肢动物出现之前。
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