目的:研究necroptosis——一种新的细胞死亡方式在颅脑创伤(TBI)后的发生发展情况,以及探索亚低温干预对其表达变化的影响。初步探讨necroptosis在TBI组织病理发生发展中的潜在意义,为揭示亚低温治疗在TBI后发挥脑保护作用的潜在机制提供新层次的分子学基础。方法:构建成年雄性SD大鼠(210-260 g)液压颅脑创伤模型,按伤后6h、24h和72h不同时段取损伤侧大脑皮层和海马组织,通过荧光定量PCR和Western-blot检测necroptosis的关键调控分子RIP3和MLKL在不同时间段mRNA和蛋白的表达变化;在完成打击操作后30分钟进行亚低温(33-35)或侧脑室药物注射处理。通过Western-blot和免疫组化染色等观察亚低温对TBI后6h伤侧皮层和海马脑组织RIP1、RIP3和MLKL蛋白表达变化,活体碘化丙啶染色检测细胞坏死情况,HE染色检测脑组织挫伤量等;通过Western-blot检测注射对照试剂DMSO,以及nec-1、GSK’872和NSA等坏死性凋亡靶向抑制剂对TBI后6h伤侧皮层炎症因子HMGB1、TNF-α、IL-6和IL-18表达情况。结果:与SHAM组相比较,伤侧皮层RIP1、RIP3和MLKL在TBI后6h明显升高(p<0.05),而在24h和72h时间段则无明显差异;海马组织仅在TBI后6h的RIP1和RIP3的免疫组织化学染色中出现明显升高(p<0.05),在Western-blot检测中坏死性凋亡的关键蛋白表达均未见明显差异;在使用亚低温处理后,伤侧皮层RIP1、RIP3和MLKL以及伤侧海马RIP1、RIP3表达均明显降低;TBI组PI阳性染色细胞数较SHAM组明显增多(p<0.01),在HT处理后显著下降(p<0.01);TBI后亚低温组较常温组脑组织挫伤量显著减少(p<0.01);挫伤侧皮层组织HMGB1、TNF-α、IL-6和IL-18等炎症因子表达在TBI后6小时均较SHAM组出现不同程度升高,并均可被亚低温及GSK’872显著抑制;此外,NSA可抑制TNF-α、IL-6和IL-18表达,HMGB1表达则无显著性降低;而nec-1则可减少HMGB1和IL-6的表达,TNF-α和IL-18表达则无明显区别。结论:颅脑创伤后早期(6h)大脑伤侧皮层及海马组织病理生理发生发展机制或与坏死性凋亡相关。亚低温的脑保护作用机制可能与其同时抑制坏死性凋亡信号通路蛋白及与坏死性凋亡相关炎症因子的表达有关,或为TBI后针对坏死性凋亡的靶向治疗提供基础研究依据。