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目的:CBP,即CREB结合蛋白(CREB-binding protein),参与许多生物进程,包括胚胎的发育生长调控以及体内平衡等等。其定位在人的染色体16p13.3区域,与定位在22q13的P300有高度同源性。通过与许多转录因子相互作用,CBP能转录共活化并增加靶基因的表达。与此同时,CBP具有组蛋白乙酰转移酶的活性,能通过介导组蛋白或非组蛋白的乙酰化参与基因的反式激活或抑制。CBP与P300一起,能通过基因变异,染色体易位伴随变异体富集在染色质结构上。CBP与许多肿瘤相关,包括结肠癌、肺癌、胰腺癌、急性骨髓白血病等。抑制CBP/P300组蛋白乙酰转移酶活性或者抑制CBP作为转录共活化子的活性已经被发现能在体内外抑制神经母细胞瘤、胰腺癌、急性骨髓白血病的生长。在肺癌中发现,CBP在不同的肺癌细胞系里高表达,并且与h TERT的表达成正相关。CBP阳性表达的病人总生存期和无病生存期明显低于CBP阴性表达的病人。尽管如此,CBP参与肺癌发生发展的具体分子机理仍不十分清楚。本课题旨在通过研究阐明上述分子机理,为发展CBP作为新的肺癌治疗靶点提供实验依据。方法:在本实验中,采用免疫组化分析CBP在肺癌细胞和组织中的表达;采用MTT法检测敲低CBP或者抑制它的乙酰转移酶活性对人肺癌细胞A549、H1299、H322和H460细胞活力的影响;同时检测CBP对人正常肺组织细胞HBE细胞活力的影响。通过细胞迁移实验、细胞集落形成实验和细胞凋亡检测,检测敲低CBP或者抑制其乙酰转移酶活性对肺癌细胞生物学的功能抑制作用。在分子机制研究中,运用免疫印记实验,研究CBP对H1299细胞凋亡、迁移、增殖相关蛋白表达的影响;运用免疫荧光技术,研究细胞色素C的定位及表达;运用免疫共沉淀及激光共聚焦免疫荧光技术,研究CBP与CPSF4相互作用,以及表达的共定位;通过MTT、FACS、免疫印记等实验研究CBP和CPSF4联合作用对肺癌细胞增殖和凋亡等的影响;最后通过组织芯片染色,结合病人的预后资料,统计学分析CBP和CPSF4单独或者联合与病人性别、年龄等的相关性,及与病人预后的联系。结果:(1)CBP在肺癌细胞和肺癌组织中高表达;(2)CBP敲低或活性阻断抑制肺癌细胞的增殖和迁移;(3)CBP敲低或活性阻断促进肺癌细胞的凋亡;(4)CBP敲低或活性阻断下调MAPK信号通路;(5)CBP与CPSF4相互作用并且介导CPSF4的乙酰化;(6)CBP和CPSF4协同调控h TERT的转录与表达;(7)CBP和CPSF4协同调控肺癌细胞的生长和凋亡;(8)CBP和CPSF4的过表达与肺癌病人的不良预后呈正相关。结论:CBP能通过上调C-Raf/MEK/Erk和下调cytochrome C/caspase信号通路诱导肺癌细胞的增殖,这种诱导过程的发生需要CPSF4的参与。凭借CBP的富集,与CBP的相互作用,CPSF4被CBP乙酰化,协同调控下游基因,包括h TERT的转录并进而协同调控肺癌细胞的生长。CBP和CPSF4在肺癌组织中同时高表达,且与肺癌病人的不良预后呈正相关。综上所述,CBP通过靶向MAPK和CPSF4信号通路调控肺癌细胞的生长,其非常有可能成为肺癌治疗的潜在靶点。