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microRNA(miRNA)是一类长度在19-25个碱基长的，单链非编码RNA；其特点是进化上保守，存在形式多样，在基因中的位置也保守；其担负着1/3以上的基因表达调控功能。有研究表明，在哺乳动物血浆中发现了多种成熟的miRNA，这些miRNA分子在分离提取后比一些大分子量RNA稳定的多。然而，人们一直认为摄食的核酸成分，在消化到分解为单核苷酸，甚至分解为碱基后被小肠吸收，对于miRNA的稳定性，和功能性质值得研究。因此，从食品科学的角度出发，系统的研究摄食miRNA对机体的作用和健康的影响很重要。我们的目的是获取大量可食用的miRNA原料。如果能收集到自然界稳定存在的miRNA，对在食品领域研究miRNA的功能性质有很大的理论和实际意义。本论文研究的目的包括以下三方面的内容：(1)从鱼糜生产废料中提取miRNA，通过醇沉浓缩，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测提取的miRNA分子及其含量。(2)设计凝胶膜液态电泳装置以富集miRNA，以FITC荧光标记的ssDNA分子作为指示样品，摸索富集装置稳定工作的条件。(3)建立通用RNA转录系统，用生物酶法大量制备目的miRNA。用低毒性的RNA提取液(内含多种阴离子表面活性剂)，水浴100℃，提取15-20min得到的RNA，相比普通RNA提取方法得到的大片段RNA含量低，提取的小分子RNA的比例高。在食品加工废液体系中小RNA比大分子RNA稳定的多。我们期望找到有效的方法对小RNA进行富集。本文设计了特殊的凝胶膜电泳富集miRNA的富集模型，且凝胶膜可更换。首先对电泳装置稳定工作的条件进行实验摸索，我们确定电压为300V,在低离子浓度电泳缓冲液(0.2xTBE或更低)时进行电泳。正极体积是负极的1/10，电泳时间定为40min。通过凝胶膜电泳相当于把小RNA的浓度浓缩了原来的10倍。鱼糜漂洗废液中含有的核酸成分复杂，除小分子RNA迁移到膜的另一端，大分子降解物也迁移过膜。通用型RNA转录系统，利用含T7启动子的通用接头序列，在T4DNA连接酶作用下，连接成转录模板，再通过T7RNA聚合酶，转录出了带有一小段启动子序列的miRNA。再经DNAzyme切割得到我们的目的RNA序列。通过环化含DNAzyme活性中心的链，控制了核酸酶切割RNA的活性，为缓慢得到成熟miRNA提供了依据。本论文对miRNA的富集与制备进行了初步研究，建立了miRNA富集装置模型，同时，用通用RNA转录系统合成了miRNA。具体结论如下：首先，提取到了鱼糜漂洗废液中稳定存在的miRNA，但浓度低。其次，设计并成功建立了液态凝胶膜电泳富集miRNA小试装置。得到了装置工作稳定的条件：电压300V,低电泳缓冲液浓度(0.2xTBE)。首先成功富集到了指示样品ssDNA，当以鱼糜漂洗废液进行实验，也得到了预期的效果：除小RNA迁移过膜到正极端，降解的核酸片段也迁移过膜进入了正极体系。再次，建立了通用RNA转录系统：高效连接得到miRNA的转录模板，T7RNA聚合酶转录出可观的中间产物，借助DNAzyme成功切出了大量的目的miRNA。