甾体化合物微生物转化的研究

来源 :江西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:smarten
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目前,只有少量的甾体药物或药物中间体是通过微生物转化得到的,而且许多转化甾体的微生物菌株尚未被发现,所以,筛选具有转化甾体化合物能力的微生物菌株,分离得到有价值的转化产物具有重要的应用价值。本文在菌株的筛选和鉴定、转化产物的结构鉴定、转化发酵条件的优化和转化系统的建立方面进行了研究。主要成果如下:  1、本文首先利用Burkholderia cepacia SE-1转化16,17-α环氧孕烯醇酮,分离得到产物20-羟基-16α,17α环氧孕甾-1,4-二烯-3-酮,并首次报道该物质对细胞分裂周期蛋白25B(CDC25B)的药物活性。  2、在Burkholderia cepacia SE-1转化16,17-α环氧孕烯醇酮获得活性化合物的基础上,实验考虑在土壤微生物群中筛选具有转化甾体化合物的菌株。实验发现,新分离菌株S823能够转化胆固醇,与16 s rRNA基因序列比较,证明分离菌株S823与粘质沙雷氏菌属(Serratia marcescens)密切相关。新分离菌株IS547,能够转化多种甾体化合物(例如胆固醇、麦角固醇、氢化可的松、孕激素、孕烯醇酮和16,17-α环氧孕烯醇酮),与18s rDNA基因序列比较,证明分离菌株IS547与枝孢霉属(Cladosporium)密切相关。这是第一次报道利用沙雷氏菌S823或枝孢霉IS547转化胆固醇和16,17-α环氧孕烯醇酮。  3、发酵转化得到的发酵液,离心或过滤处理后,萃取相通过硅胶薄层色谱法和柱层析法进行分析。产物结构运用核磁共振光谱和质谱进行鉴定。得到的产物是7β-羟基胆固醇和7-酮基胆固醇,7-羟基16α,17α-环氧孕甾-4-烯-3,20-二酮和20-羟基16α,17α-环氧孕甾-4-烯-3-酮。  4、实验对分离菌株IS547的最优发酵条件进行了初探:底物添加量0.8 g/L,底物添加时间24 h,初始pH7,接种量10%,装液量50 ml,28℃发酵96 h,此时,产物4的转化率为33.46%,比优化前提高了20.55%,产物5产率的平均值为26.67%,比优化前提高了17.41%,菌体生物量为8.83 g/L,比优化前提高了3.86 g/L。最佳发酵条件下的转化率得到明显改善。在活性甾体药物中间体的生产过程中,我们阐述的方法是一种高效、快速和廉价的生物转化体系。
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