放射治疗（radiotherapy,RT）已经成为鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）不可缺少的治疗手段,但局部复发和远处转移仍然是治疗失败的两个重要的原因。更匪夷所思的是,而RT本身却可能是这些恶性进程的诱发原因。肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）具有自我更新的能力,可以在治疗中存活下来,持续增殖分化以启动恶性进程,从而导致治疗失败。电离辐射（ionizing radiation,IR）已被证明在许多癌症中诱导干细胞表型,促进肿瘤的恶性进程。课题组前期研究也显示,IR可以提高NPC残癌细胞干细胞表型的表达。IR诱导的多种生物因子可以在肿瘤微环境中引发促炎免疫反应。其中促炎因子前列腺素E2 （prostaglandin E2,PGE2）是人类多种恶性肿瘤中含量最丰富的前列腺素,在促进肿瘤生长中发挥着重要作用,而且课题组前期证实了IR可以诱导NPC细胞PGE2分泌水平和表达水平的提高^[1]。我们模拟NPC的临床分割RT方式,利用2Gy ⁶⁰Coγ射线连续多次照射NPC细胞,建立辐射后NPC残癌细胞株。借助细胞增殖—活性检测（cell counting kit-8,CCK8）实验筛选塞来昔布对NPC残癌细胞的半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）。采用体外悬浮成球、qRT-PCR和WB实验,验证塞来昔布对NPC残癌细胞干细胞表型的影响。在阻断内源性PGE2后,利用qRT-PCR和WB检测外源性PGE2对NPC残癌细胞干细胞表型标志物的影响。最后借助慢病毒载体感染建立稳定调变前列腺素E2受体（prostaglandin E2 receptor,EP）2/EP4的NPC残癌细胞。以其作为研究模型,采用WB和细胞免疫荧光实验检测仅在外源性PGE2的作用下,稳定调变EP2/EP4的NPC残癌细胞中干细胞表型标志物的表达差异。本研究从辐射后肿瘤炎性微环境角度,探寻在NPC残癌细胞中外源性PGE2通过其受体对干细胞表型的作用与机制,以期寻找NPC在RT后的新辅助治疗方式和新靶向治疗方向,减少恶性进程的发生,从而提高治疗效果。研究目的:1.明确塞来昔布对NPC残癌细胞干细胞表型的作用。2.证实在塞来昔布抑制内源性的PGE2的基础上,外源性PGE2对NPC残癌细胞干细胞表型分子标志物的作用。3.探究外源性PGE2提高NPC残癌细胞的干细胞表型标志物表达的分子通路。研究方法:1.经过2Gy⁶⁰Coγ射线连续7次照射CNE-1和5-8F细胞,建立辐射后残癌细胞株模型。2.采用CCK8实验,筛选塞来昔布对CNE-1和5-8F残癌细胞的IC50。3.通过体外悬浮成球实验、qRT-PCR和WB检测塞来昔布对CNE-1和5-8F残癌细胞成球能力及干细胞表型标志物SOX2、OCT4和KLF4表达的影响。4.通过塞来昔布抑制CNE-1和5-8F残癌细胞内源性PGE2的基础上,加入外源性PGE2刺激NPC残癌细胞,采用qRT-PCR和WB实验检测外源性PGE2对CNE-1和5-8F残癌细胞干细胞表型标志物SOX2、OCT4和KLF4的影响。5.借助慢病毒载体感染CNE-1和5-8F残癌细胞,分别建立稳定下调EP2/EP4的NPC残癌细胞。6.以稳定调变EP2/EP4的CNE-1和5-8F残癌细胞作为研究模型。通过塞来昔布阻断内源性PGE2,仅在外源性PGE2的条件下,采用WB和细胞免疫荧光实验检测,稳定调变EP2/EP4的CNE-1和5-8F残癌细胞中SOX2的表达差异。实验结果:1.通过连续7次⁶⁰Coγ射线照射CNE-1细胞,获得CNE-1残癌细胞株E-R7;对5-8F细胞进行同样地处理,最终获得5-8F残癌细胞株F-R7。2.CNE-1和5-8F残癌细胞的塞来昔布的IC50分别为131μM和98μM。3.体外悬浮成球实验、qRT-PCR和WB实验结果显示,塞来昔布可降低CNE-1和5-8F残癌细胞成球能力及干细胞表型标志物SOX2、OCT4和KLF4的表达。4.qRT-PCR和WB实验结果表明,抑制内源性PGE2的基础上,外源性PGE2可提高CNE-1和5-8F残癌细胞的SOX2的表达,不能提高OCT4和KLF4的表达。5.WB和免疫荧光结果证明,在塞来昔布抑制内源性PGE2的基础上,下调EP2可抑制外源性PGE2对CNE-1和5-8F残癌细胞中SOX2的促进作用。结论:1.塞来昔布可抑制连续多次⁶⁰Coγ射线照射后CNE-1和5-8F残癌细胞的干细胞表型。2.经塞来昔布抑制内源性PGE2产生后,外源性PGE2可提高CNE-1和5-8F残癌细胞的SOX2的表达,但不能提高OCT4和KLF4的表达。3.经塞来昔布抑制内源性PGE2产生后,外源性PGE2通过EP2且不通过EP4,提高CNE-1和5-8F残癌细胞中SOX2的表达。