本研究探讨了水牛精子胞质内显微受精技术的操作条件，卵子的化学激活和精子的预处理对ICSI结果的影响，初步建立了水牛精子胞质内显微受精技术的操作程序。 借助显微操作仪，将尼里／拉菲水牛冷冻-解冻精子注入经体外成熟22-24h的水牛卵母细胞质内，体外培养胚胎，观察其发育情况。本文对影响水牛ICSI结果的因素，如精子操作液中PVP的浓度，注射时卵母细胞第一极体的位置，卵母细胞的离心透明化处理和注射后卵母细胞的激活方法及精子预处理进行了研究。研究结果如下：试验一，将精子操作液中PVP的浓度从10％降低到5％，注射后卵母细胞的存活率无显著差异(100％vs．97.8％；P＞0.05)，分裂率明显提高(79.4％vs．88.6％：P＜0.05)，囊胚率有所提高，但无显著差异(23.5％vs．24.2％；P＞0.05)。试验二，显微注射时卵母细胞第一极体置于相当于时钟6点的位置与12点位置相比，分裂率无显著差异(89.5％vs．86.2％；P＞0.05)，但囊胚发育率明显提高(43.4％vs．27.5％；P＜0.05)。试验三，离心和不离心的体外成熟卵母细胞注射后的分裂率分别是94.3％和91.3％；囊胚发育率分别是23.4％和27.5％，差异均不显著(P＞0.05)。试验四，用不同的激活方法激活注射后的卵母细胞，即：(1)假注射后不激活卵母细胞；(2)精子注射后不激活卵母细胞；(3)精子注射后卵母细胞用7％Ethanol(乙醇)处理5分钟；(4)精子注射后卵母细胞用5μmIonomysin(离子霉素)处理5分钟；(5)假注射后卵母细胞用5μmIonomysin(离子霉素)处理5分钟后在含有1.9mM 6-DMAP(6-二甲氨基嘌呤)的培养液中培养3小时；(6)精子注射后卵母细胞激活方法同5。结果精子注射后卵母细胞用Ionomysin+6-DMAP激活组的分裂率显著高于第3、4组和第2组(85.8％vs．46.9％vs．49.0％vs．6.4％：P＜0.05-0.001)，囊胚发育率亦显著高于第3、4组和第2组(30.3％vs．3.1％vs．3.1％vs．0％；P＜O.05-O.001)。第5组，用Ionomysin+6-DMAP激活假注射的卵子，孤雌生殖的囊胚率也能达到16.7％。试验五，注射前精子用5mMDTT(二硫苏糖醇)预处理，注射后卵母细胞用Ionomysin+6-DMAP激活，结果与精子不经过预处理的对照组相比，原核形成率有所提高，但差异不显著(20.3％vs．11.2％；P＞0.05)，分裂率亦无显著差异(87.0％vs．84.4％：P＞0.05)，但囊胚发育率显著提高(42.8％vs．27.5％；P＜O.05)。 以上结果说明：(1)适当降低PVP的浓度可以促进水牛卵母细胞获得胚胎发育的能力，并且不会增加精子显微注射的难度。(2)注射时水牛卵母细胞的极体位于6点的位置，卵母细胞获得胚胎发育的能力高于12点位胃。(3)水牛卵母细胞的低透明度不会影响显微受精的效果。(4)注射后卵母细胞的人工激活对于水牛的单精子显微 阶1：沦义：水十精了胞质内显微受悄的初步叫穴 受精是必要的，但却同时引起部分卵子的孤雌生殖。（5）DTh预处理水牛精于有助于 提高ICSI的效率。