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目的 研究恶性黑色素瘤细胞与间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)间的相互作用及作用机制,从而进一步明确恶性黑色素瘤血管形成机制中内皮细胞来源和恶性黑色素瘤细胞多种因子表达情况及间充质干细胞对其表达的影响,丰富肿瘤局部微循环建立模式的相关理论,并为恶性黑色素瘤中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)自分泌机制和正反馈环路的研究提供一定的理论依据。 方法 通过四肢长骨分离和骨髓腔冲洗得到骨髓,应用贴壁筛选等细胞筛选方法,选取适当血清浓度、细胞接种密度等细胞培养条件进行小鼠骨髓间充质干细胞的分离和扩增培养,通过倒置相差光学显微镜观察细胞光镜下形态,并应用免疫组织化学染色方法,通过倒置荧光显微镜、倒置相差光学显微镜、图像采集系统观察并检测CD44、CD105、CD34和CD45等指标的染色结果进行细胞表型鉴定。 通过体外进行MSC细胞的单独对照培养和与恶性黑色素瘤细胞(B16细胞)的非接触式共培养,应用倒置相差光学显微镜对比观察和分析单独对照培养和非接触式共培养条件下的MSC细胞光镜下形态,通过激光扫描共聚焦显微镜、倒置荧光显微镜、倒置相差光学显微镜、图像采集系统观察和检测CD44、CD105、CD34、CD45、Ⅷ因子、VEGFR-1和VEGFR-2等7种指标免疫组织化学染色结果,并对所得结果进行统计学处理以明确两组间7种指标免疫组织化学染色结果的差异和观察透射电镜下超微结构的变化,以及通过激光扫描共聚焦显微镜、倒置荧光显微镜、倒置相差光学显微镜、图像采集系统观察和检测MSC细胞和与恶性黑色素瘤细胞(B16细胞)在非接触式共培养条件下的恶