目的蠕形螨俗称毛囊虫(follicle mite),它们在分类上属于真螨目,蠕形螨科(Demodicidae),永久性寄生于人和哺乳动物的毛囊和皮脂腺内。能寄生于人体的蠕形螨包括两个种,即毛囊蠕形螨(Demodex folliculorum Simon,1842)和皮脂蠕形螨(Demodex brevis Akbulatova,1963),分别寄生在人的毛囊和皮脂腺内。人体蠕形螨病是最常见的皮肤病之一,近年随着人们对美容要求的提高,蠕形螨病的预防和治疗问题,受到专业人士和民众的关注,但是,目前对蠕形螨的基础理论研究尚处在低水平,分子生物学研究才刚刚起步。cDNA文库是研究及鉴定生物的未知功能基因的一种很有效的手段,蠕形螨cDNA文库的构建为今后利用文库筛选蠕形螨的未知功能性基因序列及进一步探究该基因的功能等方面的分子生物实验研究做好铺垫。山羊蠕形螨cDNA文库的构建也为人体蠕形螨的cDNA文库的构建的探索提供方法依据和技术支持,为进一步探索其分子致病机理打下基础。方法采用自然沉降法收集山羊蠕形螨样本。从济南市天桥区桑梓店镇山羊养殖场获取新鲜的波尔山羊皮,用手术刀从内侧面剖开皮肤结节,从中取得干酪样物。在解剖显微镜直视下,用自制挑螨针清洗分离蠕形螨个体,将螨挑入另一张滴有清洗液的凹玻片上,反复两次,在将螨跳入无菌双蒸中清洗,反复两次。将洗净的足量的螨置于自制的消毒微型研钵中,保持低温下研磨。将蠕形螨匀浆移入EP管中,用TransZol Up试剂盒提取山羊蠕形螨的总RNA,经凝胶电泳检测总RNA的完整性。参照试剂使用说明书,以RNA为模板,在反转录酶的作用下合成第1链cDNA,再通过LD-PCR获得第2链cDNA。为提高文库质量,用凝胶回收法将小于500bp的片段去除来纯化双链cDNA。将大于500bp的cDNA片段与pGM-T载体连接,然后将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞构建蠕形螨的cDNA文库,最后对文库进行鉴定及分析。结果采集到了足量的蠕形螨样本,成功提取了高质量的山羊蠕形螨总RNA,经检验总RNA结构完整且无明显降解,能满足构建cDNA文库的需要。获得的双链cDNA,经电泳检测显示,呈弥散的带状,集中在200～3000bp,符合真核生物mRNA分布规律,表明合成的双链cDNA质量较好,较为完整。去除小于500bp的片段,纯化后的cDNA片段与pGM-T载体连接,将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞TOP10建成了蠕形螨cDNA文库,经鉴定cDNA文库的重组效率达98%,库容量为2.56×106cfu,插入片段平均长度大于1000bp,达到构建cDNA文库的要求。结论本次实验研究成功的提取了蠕形螨的总RNA,并构建了山羊蠕形螨cDNA文库。cDNA文库是研究及鉴定生物的未知功能基因的一种很有效的手段,蠕形螨cDNA文库的构建为今后利用文库筛选蠕形螨的未知功能性基因序列及进一步探究该基因的功能等方面的分子生物学实验研究做好了铺垫。山羊蠕形螨cDNA文库的构建也为将来人体蠕形螨的cDNA文库的构建提供了方法依据和技术支持,为进一步探索人体蠕形螨病致病机理、诊断、治疗和预防方法的研究奠定研究基