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实验目的本实验主要研究KLF5和KLF6蛋白及mRNA在食管癌组织和食管正常组织中的表达情况,研究KLF5和KLF6基因表达与食管癌发生发展的关系,探讨KLF5和KLF6蛋白表达与患者临床参数之间的关系,并在蛋白质水平上分析KLF5基因和KLF6基因表达之间的关系,以进一步研究KLF5和KLF6基因在食管癌组织中的作用机制。材料和方法1标本来源免疫组化用标本来源于郑州大学第二附属医院病理科2011年2月-2011年7月存档的蜡块90例,所有蜡块均为手术切术的食管癌组织及其相应的正常组织,其中食管正常组织30例,食管癌组织30例,相对应的淋巴结组织30例。标本入选标准：(1)所有标本经病理检查均为食管正常组织、食管鳞状细胞癌组织和淋巴结组织；(2)术前均未做任何放疗和化疗；(3)有完整的临床病理资料,包括性别、年龄、浸润深度、有无淋巴结转移、肿瘤大小及临床分期。RT-PCR用标本收取胃镜及手术切除新鲜标本42例,其中食管正常组织(至少距肿瘤边缘5cm)21例,食管癌组织21例。2采用免疫组织化学和RT-PCR方法分别检测KLF5和KLF6基因在食管正常组织和食管癌组织中蛋白及mRNA表达情况。3统计学处理采用SPSS10.0统计软件包进行分析,检验方法为四格表x检验和Fisher确切概率法,两者之间的表达关系用McNemar,关联性分析用Pearson关联性分析,定量资料的比较采用配对资料的t检验,以α=0.05为检验水准,以P<0.05时认为差异具有统计学意义。结果1 KLF5蛋白表达位于细胞质和细胞核,颜色为黄色或棕黄色。KLF5蛋白在30例食管正常组织中有16例表达阳性(阳性率53.3%),其中有6例仅在细胞核中阳性表达,8例仅在细胞质中表达,2例在细胞质和细胞核中均有表达。30例食管鳞状细胞癌组织中有23例表达阳性(阳性率76.7%),其中12例在细胞核中表达,有2例在细胞质中表达,9例在细胞质和细胞核中均有表达。我们分析了细胞核中KLF5蛋白在食管正常组织和癌组织中的表达,结果显示细胞核中KLF5的蛋白阳性表达在食管癌组织中明显高于正常组织,其差异具有统计学意义(P=0.001)。2 KLF6蛋白表达位于细胞质和细胞核,颜色为黄色或棕黄色。KLF6蛋白在正常食管组织中的表达阳性率为26.7% (8/30),其中有5例仅在细胞核中表达阳性,2例在细胞质和细胞核中均表达阳性,1例仅在细胞质中表达阳性；KLF6蛋白在食管癌组织中表达阳性率为53.3%(16/30),其中3例仅在细胞核中表达阳性,1例在细胞质和细胞核中均表达阳性,12例仅在细胞质中表达阳性。KLF6蛋白在食管癌组织中的表达阳性率明显高于正常组织,其差异具有统计学意义(P=0.035)。3 KLF5蛋白在食管癌组织细胞核中的阳性表达与患者的年龄、性别、肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移、肿瘤大小和临床分期之间均无明显的相关性。4食管癌组织中KLF6蛋白的阳性表达与患者的性别、年龄、肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移、肿瘤大小和临床分期之间均无明显的相关性。5正常食管组织中KLF5和KLF6蛋白之间的阳性表达无相关性；正常食管组织中细胞质和细胞核中KLF5和KLF6的表达均无相关性。6食管癌组织中KLF5和KLF6蛋白的阳性表达无相关性(P=0.092)；食管癌组织细胞核中的KLF5和KLF6蛋白表达具有明显的负相关(P=0.000),相关系数为r=-0.174;而在食管癌胞质中KLF5和KLF6蛋白表达无相关性(P=0.754)。7 KLF5和KLF6蛋白均在无癌细胞转移的淋巴结组织中表达阴性,在有癌细胞转移的淋巴结组织中表达阳性。8 RT-PCR结果示：KLF5和KLF6mRNA的表达在食管癌中均高于正常组织。结论1 KLF5和KLF6蛋白及mRNA表达与食管癌有关, KLF5和KLF6基因的异常表达可能促进食管癌的发生,其发生机制有待进一步研究。2食管癌组织细胞核中KLF5和KLF6蛋白表达之间具有明显的负相关,KLF5和KLF6蛋白在细胞核中可能具有拮抗作用,具体作用机制有待进一步深入研究。