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目的:原发性肝癌(PHC,简称肝癌)早期缺乏特异性诊断手段,临床发现多是中晚期病例。PHC生物学行为恶劣,自然病程进展快,目前治疗手段效果极其悲观。随着免疫学和分子生物学的快速进展,利用现代科技手段阐述PHC的发生、发展规律,为攻克PHC展示了美好的前景。人端粒酶逆转录酶(HTERT)在肿瘤诊断及治疗中的研究已经取得了一定的进展,大多数人类恶性肿瘤细胞存在HTERT活性,HTERT已被认为是恶性肿瘤诊断和治疗的相关靶点。C-myc蛋白是由myc原癌基因编码,参与细胞的分化与增殖,其调控表达异常与肿瘤发生密切相关。增殖细胞核抗原Ki-67表达于增殖状态的细胞核基质中,和细胞的增殖与肿瘤的发生、浸润、转移等密切相关。大量研究表明,HTERT、C-myc、Ki-67均与恶性肿瘤有关,但在PHC组织中,三个因子同步测定的实验未见报道。本课题通过同步检测人PHC组织中三者的表达规律,探讨三者在PHC的发生、发展以及生物学行为中的作用。
方法:收集近两年来有明确病理诊断的37例PHC存档蜡块,5例正常肝组织(取自尸检),请病理学副主任医师重新作出病理诊断(肝细胞肝癌35例、肝内胆管细胞性肝癌1例、混合性肝癌1例),并按WHO分级标准分级:高分化(1级)5例、中分化(2级)17例、低分化(3级)15例。按福州迈新公司推荐的快速免疫组化法,采用即用型快速免疫组化MaxVision试剂盒、兔抗人HTERT多克隆抗体、鼠抗人C-myc单克隆抗体、鼠抗人Ki-67单克隆抗体对所有标本行免疫组化检测。表达强度根据染色深浅和阳性细胞比例分为阴性、弱阳性、中度阳性、强阳性4级。使用SAS6.12软件,分析HTERT、C-myc、Ki-67与PHC临床病理特征的关系以及三个因子之间的相互关系。
结论:
1.HTERT 在 PHC 中具有高度敏感性,其表达程度和PHC的分化有关,细胞分化越差,表达越强,提示利用HTERT的测定,有助于肝癌的诊断和预后分析。
2.C-myc基因参与了PHC的发生阶段,并在癌变后继续发挥作用,是 PHC 浸润、复发及预后等生物学行为的影响因素。
3.Ki-67是反映 PHC 细胞增殖的良好指标,其在PHC的浸润及转移等行为中可能起到关键性作用。检测Ki-67的表达,是临床对 PHC 进行诊断、病理分期、判断预后一种方法。
4.HTERT和C-mvc对PHC细胞的生物学影响是独立的。HTERT的生物调控可能是多因素共同作用。
5.实验发现PHC中,HTERT的表达和Ki-67表达有关,其强度分布随 PHC 病理分级增加而加大。提示深入研究HTERT 和 Ki-67的内在联系,为PHC的基因治疗提供依据。
6.PHC中C-myc和Ki-67有密切关系,联合检测有助于PHC的诊断和判断预后。
7.利用PHC存档蜡块成功检测了HTERT、C-myc、Ki-67的表达情况,有利于对PHC进行回顾性分析研究。
8.文献中未见免疫组化技术同步检测PHC存档蜡块中HTERT、C-myc、Ki-67的表达,本课题成果证明,这是一个简便、重复性好、易于推广的方法。