实验目的:子宫内膜癌被称为是女性的生殖系统中最为常见的恶性肿瘤其中之一。流行病学研究表明,包括高龄、初潮提前、更年期推迟、未经产、长期使用雌激素、肥胖和糖尿病在内的某些危险因素与子宫内膜癌的风险增加有关。绝大多数子宫内膜癌是源于单层上皮细胞的癌症。根据其临床特征和发病机制,子宫内膜癌大体可以分为两种类型:Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型子宫内膜癌最常发生于更年期之前和更年期左右,占子宫内膜癌的75-90%。它们通常是子宫内膜样癌,依赖雌激素,药物治疗效果较好。Ⅱ型子宫内膜癌通常发生于较年长的绝经后人群。它们通常是非子宫内膜样癌(例如浆液性癌、透明细胞癌和粘液癌等),这种类型不依赖雌激素并且预后较差。据报告,目前有很多肿瘤抑制基因和致癌基因(例如PTEN和K-ras)与子宫内膜癌的发生有着一定的联系。细胞程序性死亡5(PDCD5),一种新近发现的促凋亡基因,它是由北京大学的人类疾病基因研究中心从他们正常培养的白血病细胞株细胞中通过克隆而获得到的,它也被称为 TFAR19(TF-1 cell apoptosis related gene 19)。PDCD5 通过与Tip60(组蛋白乙酰转移酶)的相互作用促进DNA损伤诱发的细胞凋亡,由多功能激酶CK2诱导的PDCD5磷酸化是PDCD5发挥促凋亡作用的重要步骤。PDCD5的功能与抑癌基因P53有关。PDCD5与YY1相关因子2(YAF2)相互作用,促进P53介导的基因毒性应激反应。依托泊苷治疗时去泛素化酶OTU(OTUD5)与PDCD5结合,有效的介导了 PDCD5及P53的顺序激活。PDCD5与P53结合后对P53途径起正向调控作用。PDCD5选择性介导组蛋白去乙酰化酶(HDAC3)与p53解离,诱导HDAC3的裂解及泛素依赖的蛋白酶体降解。PDCD5表达受DNAJB1负相调控,DNAJB1可以靶向PDCD5抑制P53依赖的癌细胞凋亡。此外,PDCD5可通过抑制人类骨肉瘤细胞系MG-63中的Ras/Raf/MEK/ERK信号通路来抑制肿瘤的发生,携带PDCD5基因的腺病毒可对人类白血病细胞系发挥有效的抗肿瘤作用。不仅如此,而且,目前已经在多种癌症中观察到PDCD5的下调,比如说乳腺癌、卵巢癌、胃癌、肝细胞癌、急性和慢性粒细胞白血病、胶质瘤和喉鳞状细胞癌,PDCD5的下调与肿瘤的发展和预后密切相关。这些研究表明,PDCD5可能发挥了肿瘤抑制基因的作用,在癌症的发病机制中扮演重要角色。然而,PDCD5在子宫内膜癌的表达及其在临床的应用价值尚未得到充分阐述。本课题旨在利用qRT-PCR、western blot、免疫组化及免疫细胞化学检测对照子宫内膜组织、子宫内膜样子宫内膜癌组织,以及对照子宫内膜腺上皮细胞、子宫内膜癌细胞系KLE中PDCD5的表达水平,分析其与子宫内膜癌患者临床与病理特征的相关性,初步探寻PDCD5在子宫内膜癌发生、发展过程中所起到的作用。实验方法:一、采用qRT-PCR技术来检测对照子宫内膜组织与子宫内膜样子宫内膜癌中的PDCD5mRNA表达的情况二、采用western blot技术来检测对照子宫内膜组织与子宫内膜样子宫内膜癌中的PDCD5蛋白表达的情况三、采用免疫组织化学(IHC)技术来检测子对照宫内膜组织与子宫内膜样子宫内膜癌中的PDCD5蛋白表达的情况四、采用免疫细胞化学(ICC)技术来检测对照子宫内膜腺上皮细胞与子宫内膜癌细胞系KLE中的PDCD5表达的情况五、利用卡方检验来分析PDCD5表达与子宫内膜癌患者的临床病理参数的相关性实验结果:一、qRT-PCR检测对照子宫内膜组织与子宫内膜样子宫内膜癌中的PDCD5 mRNA表达水平17份对照子宫内膜组织和16份新鲜冷冻的子宫内膜样子宫内膜癌组织中的PDCD5 mRNA检测显示,正常对照子宫内膜组织和子宫内膜样子宫内膜癌组织之间的PDCD5 mRNA表达没有显著差异(P>0.05)。二、Western blot检测对照子宫内膜组织与子宫内膜样子宫内膜癌中的PDCD5蛋白表达水平17份对照子宫内膜组织和16份新鲜冷冻的子宫内膜样子宫内膜癌组织中的PDCD5蛋白检测显示,子宫内膜样子宫内膜癌组织中的PDCD5蛋白的表达明显低于对照子宫内膜组织(P<0.001),与qRT-PCR的结果不一致。三、IHC检测正常对照子宫内膜组织与子宫内膜样子宫内膜癌中的PDCD5蛋白表达水平1、IHC结果显示,PDCD5蛋白主要位于对照子宫内膜腺细胞或子宫内膜样子宫内膜癌细胞的细胞质中,这些细胞的胞核中也有低水平的PDCD5表达。2、51份子宫内膜样子宫内膜癌组织中的PDCD5蛋白IHC检测结果明显低于53份对照子宫内膜组织中的水平(P<0.01)。3、53份对照子宫内膜组织的增殖期和分泌期之间的PDCD5表达水平没有明显差异(P>0.05)。4、中、低分化的子宫内膜样子宫内膜癌组织中的PDCD5蛋白表达明显少于对照子宫内膜组织(P<0.001);高分化的子宫内膜样子宫内膜癌组织和对照子宫内膜组织之间没有明显差别。四、ICC技术检测对照子宫内膜腺上皮细胞与子宫内膜癌细胞系KLE中的PDCD5表达水平1、子宫内膜腺上皮细胞表达细胞角蛋白,子宫内膜间质细胞表达波形蛋白。2、PDCD5阳性染色主要位于对照子宫内膜腺上皮细胞和KLE细胞的细胞质中,在上述细胞的胞核中也发现了 PDCD5的弱表达。KLE细胞中的PDCD5蛋白表达比对照子宫内膜腺上皮细胞中的表达弱。五、子宫内膜样子宫内膜癌组织中的PDCD5蛋白表达与患者临床病理参数的相关性PDCD5蛋白水平和年龄、子宫肌层浸润、FIGO期、雌激素受体或孕激素受体之间没有明显的关联,但与肿瘤分化程度有显著的相关性(P<0.05)。与高分化子宫内膜样子宫内膜癌样本相比,中、低分化子宫内膜样子宫内膜癌中的PDCD5的表达明显降低(P<0.05),这表明,PDCD5的表达可能与子宫内膜癌的发生发展相关。实验结论:一、子宫内膜样子宫内膜癌组织与对照子宫内膜组织之间的PDCD5 mRNA表达没有显著差异,但子宫内膜样子宫内膜癌组织中PDCD5蛋白比对照子宫内膜组织中减少,提示子宫内膜癌PDCD5蛋白表达可能存在转录后调控。二、子宫内膜样子宫内膜癌组织中PDCD5表达在子宫内膜的增生期和分泌期无明显差别,提示PDCD5表达可能不受卵巢激素水平的调控。三、子宫内膜样子宫内膜癌组织中PDCD5蛋白表达水平与肿瘤分化程度有关,提示PDCD5表达可能在子宫内膜样子宫内膜癌的发生发展过程中起了重要作用,并可能有助于改善预后。创新性及意义:一、本项研究首次发现PDCD5蛋白在子宫内膜样子宫内膜癌组织中表达降低,并且表达水平与肿瘤分化程度有关。二、本项研究结果提示PDCD5可能在子宫内膜癌的发生发展过程中发挥重要的作用,并有可能作为子宫内膜癌诊断和治疗的新靶点。本研究的局限性:本项研究所有结果均是临床标本及细胞的检测,缺乏体外实验和体内实验的进一步确证,有关PDCD5在子宫内膜癌中的作用及其机制还有待于进一步的探讨。