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目的选择北京中医医院名老中医治疗黄褐斑的独特药味柿叶作为研究对象,用回流法和渗漉法提取柿叶,用液-液萃取和聚酰胺柱色谱法分离柿叶提取物,分析柿叶各种提取物中的主要成分,观察柿叶各种提取物对体外培养的黑素细胞黑素代谢的影响,探讨柿叶治疗黄褐斑的有效部位。方法以水和不同浓度的乙醇为溶剂,采用回流法和渗漉法提取柿叶;采用正交设计,以总黄酮含量为指标,筛选柿叶中总黄酮的最佳提取工艺,并按照最佳提取工艺制得柿叶80%乙醇回流提取物;用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取柿叶70%乙醇渗漉提取物,用聚酰胺柱色谱法分离纯化柿叶70%乙醇渗漉提取物和80%乙醇回流提取物;用薄层色谱(TLC)法分析柿叶各种提取物中的主要成分,用高效液相色谱(HPLC)法测定柿叶各种提取物中黄酮类成分芦丁、槲皮素和山柰酚的含量;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,以熊果苷为阳性对照,考察柿叶各种提取物对体外培养的B-16小鼠黑素瘤细胞增殖作用的影响,绘制细胞增殖抑制率-药物浓度曲线,求出各药半数抑制率IC50;采用多巴氧化法,以熊果苷为阳性对照,考察柿叶各种提取物对体外培养的B-16小鼠黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响,绘制酪氨酸酶活性抑制率-药物浓度曲线。结果(1)柿叶中总黄酮的最佳提取工艺为:柿叶最粗粉用25倍80%乙醇提取3次,每次提取时间依次为1.5h、1h和1h。(2)薄层色谱结果显示:柿叶提取物中含有三萜类成分齐墩果酸、黄酮类成分芦丁、有机酸类成分原儿茶酸和鞣质没食子酸。(3)高效液相色谱法测定结果显示:同是回流提取,柿叶70%乙醇回流提取物中的芦丁、槲皮素和山柰酚含量与95%乙醇回流提取物中此三成份含量相近,但醇提取物中的含量均>水提取物;而同是70%乙醇提取物,渗漉提取物中的芦丁、槲皮素、山奈酚含量>回流提取物;柿叶70%乙醇渗漉提取物经过液-液萃取分离后,80%以上的芦丁、槲皮素和近50%的山柰酚富集于乙酸乙酯部分中;柿叶70%乙醇渗漉提取物经过聚酰胺纯化,60%以上的芦丁、槲皮素和山柰酚富集于95%乙醇洗脱物中。(4)70%乙醇渗漉提取物的各萃取部分和柿叶粗提物对黑素细胞的增殖均有抑制作用,且呈量效关系。其中,70%乙醇渗漉提取物的IC50最低,与阳性对照熊果苷相当。(5)柿叶提取物在考察的浓度范围内,对黑素细胞酪氨酸酶活性的抑制率为低浓度优于高浓度,最佳浓度范围在12.5～50μg/mL。同一系列提取物比较的总体趋势是:中等极性>极性>非极性,如70%乙醇渗漉提取物>水提取物>95%乙醇提取物,70%乙醇渗漉提取物、乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物、剩余水萃取物>氯仿萃取物。柿叶70%乙醇提取物的氯仿与乙酸乙酯萃取部分合并后对黑素细胞酪氨酸酶活性的抑制作用增强,但仍弱于70%乙醇总提取物;柿叶80%乙醇提取物的柱前水不溶部分、水洗脱部分和95%乙醇洗脱部分对黑素细胞酪氨酸酶活性的抑制作用均弱于柿叶80%乙醇总提取物,这个结果显示某一个纯化组分或某两个组分合并后,对黑素细胞酪氨酸酶活性的抑制作用均弱于纯化前的总提取物。结论柿叶通过多组分的协同作用来抑制黑素细胞的黑素代谢,极性部位稍优于非极性部位。