锶/钙交联海藻酸盐水凝胶对小鼠前体成骨细胞成骨分化的影响

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研究目的:将氯化锶和氯化钙以不同比例混合制备含锶海藻酸盐水凝胶,检测海藻酸盐水凝胶的部分理化性质,研究接种在水凝胶支架上的小鼠MC3T3-E1细胞成骨分化情况。研究方法:根据交联剂中钙离子和锶离子的比例不同,制备5组(分别为Sr0、Sr1、Sr2、Sr3、Sr4组,Sr0为对照组)交联剂终浓度为4g/L的电解液,并分别与pH值为7.4的2%wt海藻酸钠溶液等比混合交联,制备直径为15mm,厚度为1mm的圆形水凝胶。通过电感耦合等离子体光谱仪(ICP)检测各组水凝胶浸泡在磷酸盐缓冲溶液(PBS)中第1、3、5、10、14天的锶离子析出浓度;将水凝胶浸泡在含有溶菌酶的PBS中计算各组水凝胶的降解速率;将小鼠MC3T3-E1细胞接种于水凝胶表面培养,并更换成骨培养基,在第3、7、14天时检测各组细胞的碱性磷酸酶(ALP)表达情况;各组水凝胶接种MC3T3-E1细胞,在成骨培养第21天时采用茜素红染色,观察钙结节形成情况;各组水凝胶接种MC3T3-E1细胞,在成骨培养第3、7、14、21天时,采用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测各组成骨特异性基因的表达;各组水凝胶接种MC3T3-E1细胞,在成骨培养第21天时,采用Western Blot方法检测细胞外成骨相关蛋白的表达情况。结果:ICP结果显示,各组溶液的Sr2+浓度逐渐降低,从第3天开始Sr2+浓度逐渐减少,并稳定在一个近似恒定的速率,其中Sr2组的变化趋势最稳定;水凝胶降解率结果显示,随着交联剂中Sr2+浓度的增加,水凝胶降解率呈现降低的趋势;Sr2组ALP活性最高,且同其它各组比较有统计学差异(P<0.05);钙结节结果显示,Sr2组形成钙结节数量多,且单个钙结节面积大,而Sr0和Sr4组几乎无钙结节;RT-qPCR结果显示,Sr2组的成骨相关基因同其他组相比呈现出高表达;Western Blot结果显示,Sr2组的成骨相关蛋白表达也明显呈现高表达。结论:与对照组相比,随着交联剂中锶离子浓度的增加,海藻酸盐水凝胶的降解率逐渐降低;随交联剂中锶离子浓度的增加,离子释放先呈现出变缓趋势,但随着锶离子浓度的进一步增加离子释放逐渐加快,其中Sr2组离子释放趋势最平稳。根据成骨分化实验结果可知,Sr2组水凝胶促进成骨分化的作用更显著。因此,当钙、锶以等比作为海藻酸盐水凝胶的交联剂时对水凝胶各项性能改善最为明显,这为新型可注射骨组织工程材料的开发应用提供了理论支持。
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