耳鸣的发生机制目前尚不清楚,而采用水杨酸钠诱导建立的耳鸣动物模型是研究耳鸣的重要手段。前期的研究中我们运用寡核苷酸基因芯片技术分析了水杨酸钠致大鼠耳蜗基因表达谱的改变。本文依据基因表达谱改变的结果,选取基因表达差异较大的几个基因,应用实时荧光定量PCR技术对其进行验证,并对其中的一个基因表达产物应用免疫组化的方法进行了定位对比研究,从而进一步探讨耳鸣的发生机制。 目的 了解热休克蛋白27(Heat shock protein27,HSP27)基因在长期大剂量水杨酸钠作用后和神经电压门控钠通道(sodium channel,voltage-gated,type 8,alpha,Scn8a)基因在急性水杨酸钠作用后大鼠耳蜗中基因表达水平,以及长期大剂量水杨酸钠作用后HSP27在大鼠耳蜗的表达分布特点,探讨HSP27和Scn8a在水杨酸钠耳毒性中的作用及意义。 方法 应用SYBR GREEN I实时检测的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测长期大剂量水杨酸钠作用后和正常对照组中大鼠耳蜗中HSP27基因的表达以及急性水杨酸钠作用后和正常对照组中大鼠耳蜗中Scn8a基因的表达,并用管家基因β-actin作为为内参;应用免疫组化SP法结合图像分析技术检测长期大剂量水杨酸钠注射后大鼠耳蜗HSP27的表达。 结果 1.长期大剂量水杨酸钠作用后大鼠耳蜗中HSP27基因的表达水平高于正常对照组,差异有显著性(P<0.01)。2.急性水杨酸钠作用后大鼠耳蜗中Scn8a基因的表达水平低于正常对照组,差异有显著性(P<0.01)。3.HSP27在正常及长期大剂量水杨酸钠作用后大鼠耳蜗各回均有不同程度的染色,主要阳性部位是Corti氏器,螺旋神经节,螺旋韧带和血管纹。但长期大剂量水杨酸钠作用后HSP27在耳蜗各阳性部位的表达均明显增强,其中以Corti氏器的表达更明显,P值均小于0.01。 结论 1.SYBR GREEN I荧光定量PCR法可以作为一种良好的定量PCR方法对基因芯片结果进行验证2.慢性水杨酸钠作用后能够明显诱导HSP27基因在大鼠耳蜗中的表达,但急性水杨酸钠作用后Scn8a基因在大鼠耳蜗中的表达受到明显抑制。3.HSP27在大鼠耳蜗组织中的表达有选择性,且与水杨酸盐所致的耳蜗