产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）是梭菌属中致病性最强的菌种之一,是人类气性坏疽和动物坏死性肠炎、气性坏疽、肠毒血症的主要病原菌。随着我国养牛业的快速发展,该菌尤其是A型菌株已经成为牛猝死症的主要病因。为了了解黑龙江省牛源产气荚膜梭菌分离株的基因型,研制高效疫苗。本研究通过PCR方法检测产气荚膜梭菌分离株的cpa、cpb、etx、itx四种分型毒素,以及cpb2、cpb2的两个等位基因突变体（atypical cpb2和consensus cpb2）及肠毒素（cpe）基因;筛选了产毒素培养基,研制了三价类毒素灭活疫苗。首先,对13个牛产气荚膜梭菌野毒株复苏增菌、PCR分型鉴定,筛选产毒素培养基,检测毒素对小鼠的半数致死量。结果鉴定出12株A型和1株D型菌株。对Beta2和CPE两种毒力基因进行PCR检测,结果发现只有A型菌株（8/12）携带Beta2毒力基因,并且75%的菌株携带Beta2毒素非典型突变体;所有菌株均未检测到CPE毒力基因。确定产毒素效果最好的为肉肝胃消化培养基,测得A型外毒素对小鼠的半数致死量为2^-1.5/m L、C型为2^-7.17/m L、D型为2^-2.5/m L。其次,利用分子筛凝胶层析技术纯化外毒素蛋白作为包被抗原。优化后的ELISA反应条件为包被浓度4μg/m L,最佳封闭液为5%脱脂乳,二抗1:5000稀释度孵育时间为1 h。TMB底物最佳作用时间为15 min。结果表明建立的间接ELISA方法特异、敏感,重复性良好。第三,将产气荚膜梭菌外毒素溶液甲醛灭活后加入铝盐佐剂,制备了A、C、D型梭菌三价类毒素疫苗,接种小鼠,确定了疫苗的安全性和免疫效力。结果表明疫苗对小鼠安全性好,激发小鼠产生了较好的体液免疫应答,二免后一周抗体水平达到最高。二免后21 d进行攻毒保护试验,结果A型和C型产气荚膜梭菌外毒素攻毒组的免疫保护率为100%,D型梭菌外毒素攻毒组的免疫保护率为60%,对照组小鼠全部死亡。综上所述,来自黑龙江省的产气荚膜梭菌牛源分离株主要为A型,A型分离株中Beta2毒力基因检出率较高,未检测到CPE毒力基因。制备的三价类毒素疫苗对A型和C型产气荚膜梭菌感染具有较好的保护效果,本研究为产气荚膜梭菌类毒素疫苗的开发奠定了理论基础。