目的：　　本实验通过观察骨碎补总黄酮对经IL-1β诱导干预的人骨关节炎软骨细胞增殖凋亡以及Bcl-2、Bax基因及蛋白表达，iNOS、NO、MMP-1、MMP-3、TIMP-1基因表达以及NF-kB信号通路的蛋白表达的影响，从细胞水平探讨骨碎补总黄酮防治骨关节炎的可能机制，为临床提供理论指导。　　方法：　　原代分离人骨关节炎软骨细胞进行体外培养，观察其形态变化及生长情况；MTT法检测不同浓度(12.5μ g/ml，25μ g/ml，50μ g/m,100μ g/ml，200μ g/ml,400μ g/ml，800μ g/ml)对IL-β诱导干预的人骨关节炎软骨细胞的增殖影响。采用ANNEXIN-FITC/PI法检测骨碎补总黄酮低中高剂量(100μ g/ml，200μ g/ml，400μ g/ml)对IL-β诱导干预的人骨关节炎软骨细胞凋亡的影响。采用反转录—聚合酶链反应检测骨碎补总黄酮低中高剂量(100μ g/ml，200μ g/ml，400μ g/ml)对Bax、Bcl-2的mRNA表达的影响，采用ELISA法检测骨碎补总黄酮低中高剂量(100μ g/ml，200μ g/ml，400μ g/ml)对Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。采用反转录—聚合酶链反应检测骨碎补总黄酮低中高剂量(100μ g/ml，200μ g/ml，400μ g/ml)对iNOS、NO、MMP-1、MMP-3、TIMP-1的mRNA表达的影响。采用ELISA法检测骨碎补总黄酮低中高剂量(100μ g/ml，200μ g/ml，400μ g/ml)对NF-kB蛋白表达的影响。　　结果：　　1.原代软骨细胞呈多角形，培养48h后基本贴壁，传代后细胞生长加快，随着传代次数的增加细胞逐渐出现去分化，呈长梭形，至第4代出现成纤维细胞的特点。　　2.骨碎补总黄酮在25ug/ml与50ug/ml之间促进细胞增殖，在骨碎补总黄酮<25ug/ml时，促进增殖的效果不明显，可能是因为其浓度低，未起促进作用，当骨碎补总黄酮>50ug/ml时，药物的浓度太大对细胞的增殖有影响，但是增殖差异和空白组对比，未见有明显差异。　　3.ANNEXIN-FITC/PI法检测结果：诱导组与空白组比较，差异有显著性(P<0.05),表明IL-1β能够促进人骨关节炎软骨细胞凋亡；AR组与诱导组比较，差异有显著性(P<0.05),表明双醋瑞因能够抑制人骨关节炎软骨细胞凋亡；骨碎补总黄酮各剂量组与诱导组比较，低剂量组无明显差异（P>0.05），中剂量组差异有显著性（P<0.05）,高剂量组差异有明显显著性（P<0.01），表明骨碎补总黄酮能够抑制人骨关节炎软骨细胞凋亡。　　4.RT-PCR测定Bax、Bcl-2及Bcl-2/Bax mRNA结果：半定量荧光PCR结果显示，诱导组加入IL-1β诱导后，和空白组比较，IL-1β诱导组Bax的表达量明显高于对照组(P＜0.01),而Bcl-2的表达量低于空白组，差异有统计学意义（P＜0.01），Bcl-2/Bax比值低于空白组，差异有统计学意义（P＜0.01），说明IL-1β对可促进软骨细胞凋亡。各加药组分别和诱导组对比，发现Bax表达均有不同程度下降，经统计学分析后，低剂量组与诱导组比较差异无统计学意义（P＞0.05），中剂量剂量组与诱导组比较差异有统计学意义（P＞0.05）,而AR组和高剂量组与诱导组比较结果有显著统计学差异（P＜0.01）；各加药组与诱导组比较，Bcl-2表达量均有不同程度上升，低剂量组没有差异无统计学意义（P＞0.05），AR组和中、高剂量组表达差异均有统计学意义，差异显著（P＜0.01）；各加药组与诱导组比较，发现Bcl-2/Bax比值均有不同程度下降，低剂量组与诱导组比较差异无统计学意义（P＞0.05），中剂量剂量组与诱导组比较差异有统计学意义（P＞0.05）,而AR组和高剂量组与诱导组比较结果有显著统计学差异（P＜0.01）。　　5.ELISA测定Bax、Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达结果：诱导组加入IL-1β诱导后，和空白组比较，IL-1β诱导组Bax的表达量明显高于对照组(P＜0.01),而Bcl-2的表达量低于空白组，差异有统计学意义（P＜0.01），Bcl-2/Bax比值低于空白组，差异有统计学意义（P＜0.01），从蛋白水平同样证实了IL-1可促进软骨细胞凋亡。分别予以双醋瑞因及低中高浓度骨碎补总黄酮后，与诱导组比较，可见Bax表达均有不同程度下降，低剂量组与诱导组比较差异无统计学意义（P＞0.05），AR组、、中剂量组和高剂量组与诱导组比较均有显著统计学差异（P＜0.01）；各加药组与诱导组比较，Bcl-2表达量均有不同程度上升，低剂量组没有差异无统计学意义（P＞0.05）， AR组和中、高剂量组表达差异均有统计学意义，差异显著（P＜0.01）；各加药组与诱导组比较，发现Bcl-2/Bax比值均有不同程度下降，低剂量组与诱导组比较差异无统计学意义（P＞0.05），AR组、中剂量组和高剂量组与诱导组比较结果有显著统计学差异（P＜0.01）。　　6.RT-PCR测MMP-1、MMP-3、TIMP-1mRNA结果：半定量荧光PCR结果表明，和空白组对照，IL-1β组MMP-1、3 mRNA表达差异均有统计学意义(P＜0.05)差异，对于MMP-1、3 mRNA值,骨碎补总黄酮低剂量组与IL-1β组之间差异无统计学意义(P＞0.05)，中剂量组与IL-1组之间差异有统计学意义(P＜0.05)，而AR组、高剂量组与AR对照组之间差异显著(P＜0.01),TIMP-1各组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。MMP-3/TMP-1组、骨碎补总黄酮低剂量组与IL-1β组之间差异无统计学意义(P＞0.05)，AR组、中剂量组、高剂量组与IL-1β组之间差异有统计学意义(P＜0.05)。　　7.RT-PCR测NO、iNOS1mRNA结果：诱导组加入IL-1β诱导后，和空白组比较， NO分泌和iNOS的表达量明显高于空白组(P＜0.05),差异均有统计学意义（P＜0.05）。各加药组和诱导组对比，加药后，NO和iNOS表达下降，低剂量组表达差异无统计学意义（P＞0.05），而AR组和中、高剂量组表达差异显著（P＜0.01）　　8.ELISE测定NF-kB蛋白表达结果：各组中，诱导组加入IL-1β诱导后，和空白组比较，NF-kB表达量均低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。各加药组和诱导组对比，加药后，NF-kB表达下降，低剂量组表达差异无统计学意义（P＞0.05），其余各组，差异有统计学意义，其中中剂量组表达有差异统计学意义（P＜0.05）、而AR组和高剂量组表达，差异显著（P＜0.01）　　结论：　　1.第1代至第3代软骨细胞适合用于做实验。　　2.骨碎补总黄酮能够促进软骨细胞增殖。　　3.骨碎补总黄酮能够抑制软骨细胞凋亡，其抑制凋亡的原理可能是通过促进Bcl-2的表达以及抑制Bax的表达。　　4.骨碎补总黄酮能够抑制MMP-1、MMP-3、NO、iNOS的表达。　　5.骨碎补总黄酮能够抑制NF-kB的表达，抑制NF-kB信号通路的激活是骨碎补总黄酮下调人骨关节炎软骨细胞MMP-1、MMP-3、NO、iNOS表达的可能机制。