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银屑病（Psoriasis）是一种常见的以红斑、鳞屑为临床表现的慢性炎症性皮肤疾病，其病理特征主要表现为表皮角质形成细胞异常增殖、真皮浅层炎性细胞浸润以及新生血管形成。此病顽固难治，易复发，给患者的身心带来巨大伤害。然而，当前的银屑病治疗药物如糖皮质激素、阿维A、甲氨蝶呤（Methotrexate，MTX）等，虽在一定程度上缓解了症状，但却引起极大的副作用，如皮肤萎缩、激素紊乱以及免疫抑制等，从而限制了这些药物的长期使用。因此，迫切需要开发和挖掘新的银屑病治疗药物。
鸦胆子苦醇（Brusatol，BR）是苦木科（Familiy：Simaroubaceae）植物鸦胆子果实中分离出的一种天然活性化合物，近年来在肿瘤相关研究领域中表现出良好的抑癌潜力，能够有效抑制肿瘤细胞的生长和增殖，并且呈现出良好的抗炎作用。那么，与肿瘤在病理上具有相似之处（细胞过度增殖、炎性浸润）的银屑病，BR能否对其起作用呢？目前尚未见相关报告。对此，本文通过建立（i）肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）诱导的人永生化角质形成细胞（Human immortalized keratinocyte，HaCaT）炎症模型以及（ii）咪喹莫特（Imiquimod，IMQ）诱导的银屑病样小鼠动物模型，围绕抗增殖和抗炎角度出发，从体内外探讨了BR对银屑病样模型的作用效果，并阐明了相关的作用机制，以期为银屑病治疗方案提供新的参考依据。其主要研究内容和结果如下：
①BR对TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖的影响
建立TNF-α诱导的HaCaT细胞炎症模型，并通过MTS法检测该模型下BR对HaCaT细胞增殖的影响。结果显示TNF-α能够促进HaCaT细胞的增殖，而BR以剂量依赖性方式抑制了TNF-α引起的促增殖作用。为明确相关的作用机制，采用流式细胞术检测该模型下BR对HaCaT细胞周期的影响，结果显示TNF-α显著加速了HaCaT细胞从G1期向S期的转换，而BR可显著抑制G1/S期的转换过程。进一步采用Western blot检测BR对增殖相关蛋白Cornulin（CRNN）、周期相关蛋白CyclinD1以及Akt信号通路的影响。结果显示BR预处理能够明显抑制TNF-α诱导的CRNN以及CyclinD1的表达，并且抑制Akt的磷酸化水平。以上结果表明BR通过介导细胞周期停滞抑制细胞增殖。
②BR对TNF-α诱导的HaCaT细胞炎性反应的影响
通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测BR对TNF-α诱导下HaCaT细胞分泌炎性介质的影响。其结果表明TNF-α的刺激极大促进了白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、IL-8、IL-1α、IL-1β、TNF-α以及细胞间粘附因子-1（Intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）的表达，而BR预处理可显著抑制这些炎性介质的产生。此外，通过免疫荧光（Immunofluorescence，IF）及Western blot检测BR对TNF-α诱导下核因子-κB（Nuclear factor kappa-B，NF-κB）信号通路的影响。其结果表明：在静息状态下，NF-κB p65主要存在于细胞浆中，在细胞核中的表达甚微。当HaCaT细胞暴露于TNF-α的刺激时，NF-κB p65明显从细胞浆向细胞核转移，使其在细胞核中的表达显著升高。然而，BR预处理可有效抑制NF-κB p65的核转移，同时缓解TNF-α诱导的IκBα的降解并抑制细胞质中IκBα的磷酸化。以上结果表明BR通过抑制NF-κB信号通路的活化发挥抗炎作用。
③BR对IMQ诱导的银屑病样小鼠动物模型的改善作用
本文进一步考察了BR对银屑病样小鼠动物模型的作用效果。随机将35只BALB/c雌性小鼠分成5组（n=7）：Control组、IMQ组、MTX组、L-BR组、H-BR组。然后通过银屑病皮损面积和严重性指数（Psoriasis area and severity index，PASI）评分、苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色、免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）以及酶联免疫吸附测定法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）评估了BR对IMQ诱导的银屑病样小鼠模型的作用效果。其结果表明：1）BR明显改善IMQ诱导的银屑病样小鼠皮损程度，其中包括红斑、鳞屑及浸润。与IMQ组相比，L-BR组及H-BR组的PASI评分明显降低（P＜0.001）；2）BR显著抑制IMQ引起的角化过度伴角化不全、血管扩张现象，并且极大降低了表皮厚度及耳层厚度（P＜0.01）；3）BR能够缓解IMQ导致的脾肿大现象，并且降低皮损组织中CD3的表达，表明BR能够显著抑制T淋巴细胞的浸润；4）BR有效减弱了小鼠脾淋巴细胞分泌干扰素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）和IL-17的水平（P＜0.01），进而抑制了一系列炎性反应的发生。
综上所述，本文分别从细胞水平和动物水平上探讨了BR对银屑病样模型的作用效果，并在一定程度上阐明了相关的作用机制。这一研究有望为当前银屑病治疗策略提供新的研究视角与思路，同时为银屑病治疗药物的开发提供理论依据。
鸦胆子苦醇（Brusatol，BR）是苦木科（Familiy：Simaroubaceae）植物鸦胆子果实中分离出的一种天然活性化合物，近年来在肿瘤相关研究领域中表现出良好的抑癌潜力，能够有效抑制肿瘤细胞的生长和增殖，并且呈现出良好的抗炎作用。那么，与肿瘤在病理上具有相似之处（细胞过度增殖、炎性浸润）的银屑病，BR能否对其起作用呢？目前尚未见相关报告。对此，本文通过建立（i）肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）诱导的人永生化角质形成细胞（Human immortalized keratinocyte，HaCaT）炎症模型以及（ii）咪喹莫特（Imiquimod，IMQ）诱导的银屑病样小鼠动物模型，围绕抗增殖和抗炎角度出发，从体内外探讨了BR对银屑病样模型的作用效果，并阐明了相关的作用机制，以期为银屑病治疗方案提供新的参考依据。其主要研究内容和结果如下：
①BR对TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖的影响
建立TNF-α诱导的HaCaT细胞炎症模型，并通过MTS法检测该模型下BR对HaCaT细胞增殖的影响。结果显示TNF-α能够促进HaCaT细胞的增殖，而BR以剂量依赖性方式抑制了TNF-α引起的促增殖作用。为明确相关的作用机制，采用流式细胞术检测该模型下BR对HaCaT细胞周期的影响，结果显示TNF-α显著加速了HaCaT细胞从G1期向S期的转换，而BR可显著抑制G1/S期的转换过程。进一步采用Western blot检测BR对增殖相关蛋白Cornulin（CRNN）、周期相关蛋白CyclinD1以及Akt信号通路的影响。结果显示BR预处理能够明显抑制TNF-α诱导的CRNN以及CyclinD1的表达，并且抑制Akt的磷酸化水平。以上结果表明BR通过介导细胞周期停滞抑制细胞增殖。
②BR对TNF-α诱导的HaCaT细胞炎性反应的影响
通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测BR对TNF-α诱导下HaCaT细胞分泌炎性介质的影响。其结果表明TNF-α的刺激极大促进了白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、IL-8、IL-1α、IL-1β、TNF-α以及细胞间粘附因子-1（Intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）的表达，而BR预处理可显著抑制这些炎性介质的产生。此外，通过免疫荧光（Immunofluorescence，IF）及Western blot检测BR对TNF-α诱导下核因子-κB（Nuclear factor kappa-B，NF-κB）信号通路的影响。其结果表明：在静息状态下，NF-κB p65主要存在于细胞浆中，在细胞核中的表达甚微。当HaCaT细胞暴露于TNF-α的刺激时，NF-κB p65明显从细胞浆向细胞核转移，使其在细胞核中的表达显著升高。然而，BR预处理可有效抑制NF-κB p65的核转移，同时缓解TNF-α诱导的IκBα的降解并抑制细胞质中IκBα的磷酸化。以上结果表明BR通过抑制NF-κB信号通路的活化发挥抗炎作用。
③BR对IMQ诱导的银屑病样小鼠动物模型的改善作用
本文进一步考察了BR对银屑病样小鼠动物模型的作用效果。随机将35只BALB/c雌性小鼠分成5组（n=7）：Control组、IMQ组、MTX组、L-BR组、H-BR组。然后通过银屑病皮损面积和严重性指数（Psoriasis area and severity index，PASI）评分、苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色、免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）以及酶联免疫吸附测定法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）评估了BR对IMQ诱导的银屑病样小鼠模型的作用效果。其结果表明：1）BR明显改善IMQ诱导的银屑病样小鼠皮损程度，其中包括红斑、鳞屑及浸润。与IMQ组相比，L-BR组及H-BR组的PASI评分明显降低（P＜0.001）；2）BR显著抑制IMQ引起的角化过度伴角化不全、血管扩张现象，并且极大降低了表皮厚度及耳层厚度（P＜0.01）；3）BR能够缓解IMQ导致的脾肿大现象，并且降低皮损组织中CD3的表达，表明BR能够显著抑制T淋巴细胞的浸润；4）BR有效减弱了小鼠脾淋巴细胞分泌干扰素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）和IL-17的水平（P＜0.01），进而抑制了一系列炎性反应的发生。
综上所述，本文分别从细胞水平和动物水平上探讨了BR对银屑病样模型的作用效果，并在一定程度上阐明了相关的作用机制。这一研究有望为当前银屑病治疗策略提供新的研究视角与思路，同时为银屑病治疗药物的开发提供理论依据。