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成熟精子的表面含有多种蛋白,有些是精子本身所固有的,有些是在精子成熟过程中黏附到精子表面的,这些精子膜蛋白在维持精子形态结构完整、完成精子的新陈代谢和生殖功能中发挥着重要的作用,特别是与精卵识别、结合以及质膜融合等受精活动密切相关。本文以中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)为实验材料,就其精子膜蛋白组分的提取、分离、抗体制备及其免疫定位进行了研究。首先,通过分级分离的方法,从中华绒螯蟹的精荚中分离到精子,并对分离的精子进行光镜、电镜及SDS-PAGE分析鉴定。结果显示,此种分级分离的方法能够较好的从精荚中分离到大量完整的精子。其次,分别用超声波匀浆法和低渗裂解法处理精子来制备精子膜,并利用透射电镜技术对精子膜分离纯化的效果进行了鉴定。比较了用两种方法制备精子膜的优劣。结果显示,两种方法均可分离到精子膜,其中用低渗裂解法分离精子膜时,其对精子内部结构破坏较小,使分离到的精子膜中含有较少的非精子膜成分。所以采用低渗裂解法来提取分离精子膜。第三,利用AKTA Explorer 100系统中的反相层析柱对精子膜中的蛋白组分进行分离和分析。通过反相层析法,可分离出可辨的10个峰,对其中的10号峰进行了分离收集,再用SDS-PAGE对其进行了分析。结果显示,此峰中只含有一种蛋白质,分子量为64.6ku。同时对精子膜中的蛋白组分进行SDS-PAGE分析,至少可分辨出10种精子膜蛋白,其分子量均在100ku以下。第四,利用分离的精子膜蛋白10号组分免疫小鼠,制备抗血清。利用ELISA对抗血清的效价进行了测定。实验结果表明,抗血清的效价为1：500。利用双向免疫扩散法检测精子膜蛋白10号组分的组织特异性。结果显示,精子膜蛋白10号组分存在于精巢、输精管和贮精囊等组织粗提液中,而不存在于雄性中华绒螯蟹的肝胰腺、心脏、血清等组织和雌性中华绒螯蟹的血清中。利用酶标免疫组织化学法对精子膜蛋白10号组分进行定位研究。结果显示,精子膜蛋白10号组分存在于精巢组织中、贮精囊中精子的表面和输精管中精子的表面。