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目的制备羟基喜树碱-磷脂复合物(HCPT-PC),并将HCPT-PC包载进红细胞,得载羟基喜树碱-磷脂复合物的红细胞递药系统(HCPT-PC-ERs),分别对两者理化性质进行全面表征,并对HCPT-PC-ERs进行体内外评价。方法1、羟基喜树碱-磷脂复合物的制备及表征采用马尔文粒径电位测定仪、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、X-射线粉末衍射(XRPD)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)对制备的HCPT-PC粒径、形态进行表征和复合机制进行考察;并考察其溶解度和油水分配系数。2、载羟基喜树碱-磷脂复合物红细胞递药系统的制备及表征低渗预膨胀技术制备HCPT-PC-ERs,以包封率为指标,考察药物初始加入量、药物与红细胞的体积比例和低渗包载时的孵育时间等对包封率的影响,并验证优化条件。通过SEM考察红细胞载药前后的形态学变化,采用TEM和激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)验证HCPT-PC包载进红细胞中。采用血液分析仪和渗透压测定仪,考察红细胞载药前后血液学参数和渗透脆性的变化。3、HCPT-PC-ERs的体外评价.MTT法对体外肝癌细胞的生长抑制作用进行评价;用体外释放的方法考察其体外释药行为。4、HCPT-PC-ERs的药代动力学研究HPLC法测定SD大鼠血浆中HCPT的血药浓度,并进行方法学验证;以5mg/kg的剂量注射途径SD大鼠给药进行药代动力学研究,计算相关药动学参数。5、HCPT-PC-ERs的体内分布研究建立荷H22肝癌细胞的KM小鼠模型进行药效学研究。6、HCPT-PC-ERs在荷H22肝肿瘤小鼠中的药效学评价小动物活体成像技术考察药物的体内分布。结果1、HCPT-PC的制备及表征制得的HCPT-PC粒径为145.08±18.37nm,扫描电镜和透射电镜下呈均匀分布的球形,粉末衍射结果显示HCPT-PC中HCPT从结晶状态转变为无定形状态,红外光谱显示HCPT与PC的极性端,存在弱的相互作用,HCPT-PC在水、PBS、乙醇、正辛醇中的溶解度分别是HCPT的21.91、20.36、1.42、6.32倍;HCPT,物理混合物和HCPT-PC在正辛醇/水系统中的LogP分别为2.39,2.34和2.03。2、HCPT-PC-ERs的制备及表征以低渗预膨胀技术为基础,lmg/ml的药物与细胞按1:1的比例低渗孵育30min,可成功制备HCPT-PC-ERs,并获得较好的细胞存活率为76.15±6.72%、载药量为169.01±5.26μg和包封率为61.79±8.45%。载药后红细胞从载药前的两面凹的圆饼状变为球形,SEM和CLSM证实了 HCPT-PC被成功地捕获到红细胞中,HCPT-PC-ERs较正常细胞和假阳性载药细胞的平均细胞体积(MCV)值显著增加,而平均细胞血红蛋白(MCH)和平均细胞血红蛋白浓度(MCHC)显著降低,渗透脆性在0.45%NaCl和0.5%NaCl的渗透压时显著降低。3、HCPT-PC-ERs的体外评价与 HepG2、SMMC-7721 和 H22 肝癌细胞作用 48、72h 后,HCPT-PC 的 IC50值分别是 HCPT 的 3.57、11.14、2.79、37.26、21.23、24.49 倍,HCPT-PC-ERs的IC50值分别是HCPT的2.05、5.21、3.04、1.42、2.53、3.11倍。体外释药行为表现为:前15分钟43%的药物快速释放,剩余的57%药物仍存在红细胞内并保留至36小时。4、HCPT-PC-ERs的药代动力学研究药代动力学结果表明:市售HCPT在体内快速消除,4h后几乎检测不到HCPT,而HCPT-PC-ERs组可以延缓药物在体内的作用时间,至24h仍可以检测到HCPT,表现出明显的缓释效果。HCPT-PC-ERs的分布半衰期、消除半衰期、曲线下面积和平均滞留时间分别是HCPT的2.78倍、4.72倍、3.71倍和2.03倍,与游离HCPT组相比,HCPT-PC-ERs具有明显的EPR效应。5、HCPT-PC-ERs的体内分布研究活体成像结果表明,HCPT-PC-ERs组的药物较游离的Cy7-HCPT组更易富集于肝脾,并在12小时内维持较高的水平,对心、肺和甲状腺的毒副作用较游离的Cy7-HCPT低。6、HCPT-PC-ERs在荷H22肝肿瘤小鼠中的药效学评价药效结果表明,与生理盐水组相比,HCPT组和HCPT-PC-ERs组均表现出显著的抗肿瘤作用,抑瘤率分别为68.95±7.18%和89.26±1.47%。结论制备了高复合率的纳米HCPT-PC,并用低渗预膨胀技术制备HCPT-PC-ERs,克服了 HCPT水溶性差问题,载药前后血液学参数、渗透脆性及形态学变化在可接受范围内;在自体血浆中,体外释放前期呈快速释放,后续缓释的释放特点;在体药代动力学,HCPT-PC-ERs的生物利用度是HCPT的3.71倍;Cy7-HCPT-ERs较游离的Cy7-HCPT更易富集于肝脾,而在心、肺和甲状腺分布较少;在H22荷瘤小鼠中,静脉给药后,HCPT-PC-ERs的抑瘤率达89.26±1.47%,较HCPT提高20%。在实验优化的包载参数下,可将HCPT-PC包载进红细胞中。载药后的红细胞可靶向至肝脏发挥其治疗作用,红细胞可作为新型肝靶向药物递送载体。