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禽类输卵管的子宫阴道交接部和伞部存在着一种特殊的管状腺,这种腺体能使禽类精子在输卵管内长期存活,并且能够长时间保持其受精力,该腺体被称为贮精腺。禽类贮精腺能够大量表达碳酸酐酶,且碳酸酐酶4(CAⅣ)在哺乳动物精子成熟和储存的附睾部位大量表达,据此推测CAⅣ基因可能影响着母鸡体内精子的贮存。本试验以鸡为研究对象,参考鸡CAⅣ基因序列,根据基因序列的保守区设计特异性引物,内参基因选择鸡β-actin基因,用荧光定量分析CAⅣ基因在鸡输卵管伞部、膨大部、峡部、子宫部、子宫阴道交接部和阴道部的表达。结果表明子宫阴道交接部的CAⅣ基因表达量最高,显著高于其他部位的表达(p<0.05);伞部次之,其表达量显著高于除子宫阴道交接部之外的其他部位(p<0.05);而在其他四个部位表达量都比较低。CAⅣ基因在母鸡输卵管子宫阴道交接部和伞部位的高表达预示着其可能参与贮精腺内的精子储存。根据鸡CAⅣ的序列以及毕赤酵母的密码子的喜好性,合成CAⅣ基因,将CAⅣ基因克隆到p PICZαA真核表达载体中,并将重组表达质粒电转至毕赤酵母菌GS115中,得到含重组质粒的毕赤酵母菌,用终浓度为1%的甲醇诱导重组阳性菌的表达,通过SDS-PAGE电泳和His标签蛋白表达的Western Blot检测表达产物。用Ni离子亲和层析纯化表达产物,并用SDS-PAGE电泳和Western Blot检测纯化后的表达产物。结果表明重组酵母菌能成功分泌鸡CAⅣ蛋白,约为36k Da,且用Ni离子亲和层析法纯化可获得纯度较好的目的蛋白。在鸡精液内添加CAⅣ蛋白测定在不同的贮存时间下精液的p H值和精子活力的差异。结果发现,随着精液贮存时间的推移,两组精液的p H值和精子活力均显著下降(p<0.05);在精液贮存的6 h、12 h和24h时,添加CAⅣ蛋白组p H值显著低于对照组(p<0.05);在精液贮存的12 h和24h时,添加CAⅣ蛋白组精子活力显著低于对照组(p<0.05)。结果表明CAⅣ蛋白可能通过调节贮精部位的p H值和精子活力来抑制精子运动。