[目的]:建立人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型及NK细胞分离方法;检测NK细胞的细胞毒活性及其活化性受体NKG2D的表达;观察肝脏和脾脏组织病理变化。[方法]:①建立人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型先用人肝癌细胞株Hep3B接种于裸鼠皮下,形成皮下移植瘤,然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内,建立肝原位移植瘤模型(间接肝原位移植瘤模型);②检测裸鼠原发性肝癌对NK细胞免疫活性的影响分别用Ficoll-Hypaque分层液、酶消化法和机械法初步制备裸鼠外周血、肝脏及脾脏混合淋巴细胞悬液后,用Percoll不连续密度梯度分离法分离NK细胞;用LDH方法检测NK细胞的细胞毒活性;用流式细胞技术检测不同组织NK细胞NKG2D表达百分率;用H-E染色观察肝脏移植瘤对肝脏和脾脏淋巴细胞的影响。[结果]:①建立的间接肝原位移植瘤模型能稳定传代,移植瘤存活率达100%;②Percoll不连续密度梯度分离法分离的NK细胞纯度可达到68.5%;③外周血、肝脏及脾脏的NK细胞毒活性及NKG2D受体表达随着肿瘤生长逐渐下降,其中肝脏NK细胞毒活性及NKG2D表达下降明显;④荷瘤裸鼠肝脏癌组织与皮下瘤相同,癌组织异型性与时间呈正相关,脾脏淋巴小结在第4周增生明显,第8周小梁结构增多。[结论]:①人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型具有高存活率的优点,它的建立为人类肝癌的研究提供了理想的工具;②成功建立了裸鼠NK细胞分离方法;③原发性肝癌通过下调NKG2D的表达,对NK细胞有免疫抑制作用,这种作用主要发生在肝脏,但对外周血和脾脏也有影响。