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第一章 益生菌对原发性高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响及机制目的:检测原发性高尿酸血症发生时肠道乳酸杆菌和双歧杆菌的变化,以及益生菌治疗对原发性高尿酸血症血清尿酸水平及肠道尿酸转运蛋白ABCG2/BCRP表达的影响及机制。方法:1.构建尿酸氧化酶(Uricase,Uox)基因敲除的C57BL/6小鼠原发性高尿酸血症模型,采用Real-time PCR及Western-blot技术方法对该模型的敲除效率进行验证;2.实验小鼠分为4组(每组12只)。正常组:正常对照C57BL/6小鼠,每天灌胃0.2ml生理盐水;高尿酸组:Uox基因敲除的原发性高尿酸血症C57BL/6小鼠,每天灌胃0.2ml生理盐水;正常组+益生菌组(益生菌N组):正常C57BL/6小鼠每天灌胃益生菌(分别含双歧杆菌和乳酸杆菌1.0×106 CFU,溶解于0.2ml生理盐水);高尿酸组+益生菌组(益生菌H组):Uox基因敲除的原发性高尿酸血症C57BL/6小鼠每天灌胃益生菌(分别含双歧杆菌和乳酸杆菌1.0×106 CFU,溶解于0.2ml生理盐水)。3.提取各组小鼠粪便样本中总DNA,基于16S r RNA设计特异性引物,绝对定量RT-PCR法检测肠道菌群特别是乳酸杆菌及双歧杆菌的变化;采用全自动生化仪及相关检测试剂盒检测各组小鼠血清尿酸(Uric Acid,UA)、内毒素(Lipopolysaccharides,LPS)以及黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase,XO)的活性水平;采用RT-PCR及Western-blot法检测各组小鼠肠道尿酸转运蛋白ABCG2/BCRP m RNA及蛋白表达变化;采用酶比色法检测肠道菌群对尿酸的分解水平。在实验进行第0、7、14、21、28及35天检测上述指标。4.采用SPSS17.0软件进行统计学分析。结果:与正常组比较,高尿酸组小鼠肠道中双歧杆菌和乳酸杆菌的数量明显下降(P<0.05)。血清尿酸、内毒素以及黄嘌呤氧化酶活性水平明显升高(P<0.01)。肠道菌群对尿酸的分解水平显著降低(P<0.05)。肠道尿酸转运蛋白ABCG2/BCRP表达显著增加(P<0.05)。益生菌N组肠道中双歧杆菌和乳酸杆菌的数量明显升高(P<0.05),其余指标未见显著差异。与高尿酸组比较,益生菌H组肠道中双歧杆菌和乳杆菌的数量明显增加(P<0.05)。血清尿酸、内毒素以及黄嘌呤氧化酶活性水平明显降低(P<0.01),但数值仍高于正常组(P<0.05)。肠道菌群对尿酸的分解水平显著升高(P<0.05),肠道尿酸转运蛋白ABCG2/BCRP表达水平未见显著差异。结论:1.Uox基因敲除成功建立原发性高尿酸血症C57BL/6小鼠模型,原发性高尿酸血症模型鼠肠道双歧杆菌和乳酸杆菌数量减少。2.益生菌干预治疗改变原发性高尿酸血症C57BL/6小鼠模型肠道菌群的结构,使肠道双歧杆菌和乳酸杆菌的数量增加。3.益生菌干预治疗使原发性高尿酸血症C57BL/6小鼠模型血清内毒素和黄嘌呤氧化酶活性水平降低,进而尿酸生成减少,血清尿酸水平降低;4.原发性高尿酸血症C57BL/6小鼠模型尿酸肠道转运蛋白ABCG2/BCRP表达水平代偿性增加。益生菌干预治疗并未进一步上调ABCG2/BCRP的表达,但可增加尿酸在肠道中的分解,进而尿酸肠道排泄增加,血清尿酸水平降低。第二章益生菌对轮状病毒感染导致的继发性高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响及机制目的:儿童轮状病毒(rotavirus,RV)肠胃炎(gastro-enteritis,GE)发生时,可能会伴随高尿酸血症。因此,我们建立RV GE小鼠模型,进而检测血清尿酸(Uric Acid,UA)水平,以及肠道尿酸转运蛋白ABCG2/BCRP的表达变化。同时,应用益生菌乳酸杆菌及双歧杆菌治疗RV GE小鼠,进一步观察血清尿酸以及肠道尿酸转运蛋白ABCG2/BCRP的表达变化。方法:通过灌胃RV建立RV GE小鼠模型。日龄为3天的小鼠随机分为4组:正常组,RV GE组,益生菌N组及益生菌RV组。RV GE组及益生菌RV GE组给予灌胃0.2 ml含RV培养液(2×108 PFU),正常组及益生菌N组给予不含病毒的培养液灌胃0.2 ml。益生菌N组及益生菌RV GE组给予灌胃0.2 ml培养液后,同时每天给予益生菌灌胃治疗(分别含双歧杆菌和乳酸杆菌1.0×106 CFU,溶解于0.1 ml生理盐水),正常组及RV GE组每天灌胃0.1 ml生理盐水。采用全自动生化仪检测各组小鼠血清尿酸。采用RT-PCR法检测各组小鼠肠道尿酸转运蛋白ABCG2/BCRP的m RNA表达变化。在实验灌胃RV后第1、2、3、4、5、6、7、10天检测上述指标。结果:与正常组比较,RV GE组及益生菌RV组血清尿酸水平在实验进行第2,3,4,5,6,7天显著升高(P<0.01),益生菌N组血清尿酸水平未见明显差异;与RV GE组比较,益生菌N组血清尿酸水平在实验进行第2,3,4,5,6,7天显著降低(P<0.01),益生菌RV组血清尿酸水平实验进行第3,4,5,6,7,10天显著降低(P<0.05),但数值在各时间点仍高于正常组。与正常组比较,RV GE组肠道尿酸转运蛋白ABCG2/BCRP m RNA表达水平在实验进行第3,4,5,6,7,10天显著降低(P<0.05),益生菌N组ABCG2/BCRP m RNA表达水平未见明显差异,益生菌RV组在个时间点ABCG2/BCRP m RNA表达水平降低,在实验第2,3,4天差异有统计学意义(P<0.05);与RV GE组比较,益生菌N组ABCG2/BCRP m RNA表达水平在实验进行第3,4,5,6,7,10天显著升高(P<0.05),益生菌RV组ABCG2/BCRP m RNA表达水平在各时间点升高,在实验进行第3,4,5,6,7,10天差异具有统计学意义(P<0.05),但数值在各时间点仍低于正常组。结论:1.RV灌胃成功建立了轮状病毒感染小鼠模型。2.轮状病毒感染小鼠模型血清尿酸水平增加。3.轮状病毒感染小鼠肠道尿酸转运蛋白ABCG2/BCRP表达下降。4.益生菌增加轮状病毒感染小鼠肠道尿酸转运蛋白ABCG2/BCRP表达,降低了模型小鼠血清尿酸水平。