亚硝酸盐降解菌的筛选、鉴定及水质调控效果研究

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随着水产养殖业的迅速发展,亚硝酸盐会在水体中大量累积,亚硝酸盐可氧化血液中的亚铁血红蛋白,使其变成高铁血红蛋白,因此亚铁血红蛋白会失去携氧能力,从而各种组织会出现缺氧现象。过量亚硝酸盐会引起中毒,严重时可以使养殖动物死亡。同时,亚硝酸盐还是一种致癌物质。目前亚硝酸盐的去除方法有物理法、化学法和生物法等,其中生物降解亚硝酸盐的方法因具有高效率、低成本、无二次污染等特点,被人们广泛应用。微生态制剂是生物降解法中常用的添加剂,它不仅能有效净化养殖水体环境,而且还能促进养殖动物的健康生长。因此,本实验从泰安多处水体取样,置于亚硝酸盐培养基中培养,经连续驯化富集,分离获得一株降解亚硝酸盐的基础菌株JY-1,并对其进行了生理生化、16S rDNA鉴定、培养条件优化、发酵培养基优化及水质调控效果途径探究。具体结果如下:1、样品采集后采用定向富集分离法进行菌株分离。将处理完的样品置于亚硝酸盐培养基中富集驯化,培养6代,淘汰掉不能利用NO2-的微生物。通过平板划线法分离纯化得到6株菌株,命名为JY-1—JY-6。通过20L水体模拟养殖试验,评价筛选得到的菌株降解亚硝酸盐能力的强弱,结果显示菌株JY-1对水体亚硝酸盐的降解能力高于其他菌株,且效果持续性好。分别从形态学、生理生化和分子生物学三方面对菌株进行鉴定,经鉴定菌株JY-1为芽孢杆菌属中的大山芽孢杆菌。利用其对罗非鱼进行灌服试验,结果显示灌服不同浓度菌液的罗非鱼摄食能力和行动状态均正常,各组均未出现死亡现象。2、从pH值、温度、盐度、转速和C/N五个方面对菌株的生长条件进行优化,结果表明菌株JY-1生长的最适pH值为6.5,最适温度为37℃,最适盐度为1%,最适C/N为15,最适转速为180r/min。3、对菌株进行发酵培养基优化,发现当以葡萄糖为碳源,蛋白胨为氮源,NaCl、MgSO4和K2HPO4为无机盐时,菌株JY-1的芽孢产量最多。菌株JY-1最适产芽孢培养基为(1000mL):葡萄糖10g,蛋白胨10g,NaCl 1g,MgSO4 0.1g,K2HPO4 0.2g。4、对菌株JY-1进行水质调控效果研究,将其投入到养殖水体中,发现菌株JY-1能够降低水体中亚硝酸盐、总氮和氨氮的含量,并且不会造成水体中硝酸盐积累。综上所述,本试验经筛选获得的降解亚硝酸盐效果较好的菌株JY-1,经鉴定为大山芽孢杆菌;菌株JY-1生长的最适pH值为6.5,最适温度为37℃,最适盐度为1%,最适C/N为15,最适转速为180r/min;菌株JY-1最适产芽孢培养基为(1000mL):葡萄糖10g,蛋白胨10g,NaCl 1g,MgSO4 0.1g,K2HPO4 0.2g;对菌株JY-1的水质调控效果研究显示,菌株JY-1通过反硝化途径将水体中的亚硝酸盐降解,并且能显著降低水体中硝酸盐积累。
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