【摘 要】
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大肠杆菌O157:H7因具有低感染剂量(10或以上细胞)和高致病性的特点成为近十几年来国内外关注的食源性病原菌之一。土壤中的大肠杆菌O157:H7可以迁移到其它环境介质或载体的表面和内部,因此了解大肠杆菌O157:H7在土壤中的存活行为及其影响因素将有助于减少此类病原菌引起的环境生物污染。为了因地制宜,本实验共计采集了24份土壤样品,根据美国农业部分类标准可分为粉壤土、壤土、砂壤土、壤砂土和砂土。
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大肠杆菌O157:H7因具有低感染剂量(10或以上细胞)和高致病性的特点成为近十几年来国内外关注的食源性病原菌之一。土壤中的大肠杆菌O157:H7可以迁移到其它环境介质或载体的表面和内部,因此了解大肠杆菌O157:H7在土壤中的存活行为及其影响因素将有助于减少此类病原菌引起的环境生物污染。为了因地制宜,本实验共计采集了24份土壤样品,根据美国农业部分类标准可分为粉壤土、壤土、砂壤土、壤砂土和砂土。采样地点分布于中国东北部吉林省—内蒙古自治区区域,其中土壤样品的砂粒含量自西向东逐渐降低,呈现出天然的土壤砂粒梯度带。本实验致力于研究在自然条件下大肠杆菌O157:H7在砂粒梯度土壤中的存活行为。将大肠杆菌O157:H7接种到24个土壤样品中并持续记录细菌数量变化情况,使用Weibull生存模型模拟大肠杆菌O157:H7在土壤中的数量下降至检出限(100CFU gdw-1)所需的时间(ttd)及其他存活参数等动态变化。同时,对土壤理化性质指标进行测定,并提取总DNA,根据高通量测序对土壤细菌群落的组成和结构进行表征。最后,分析影响大肠杆菌O157:H7在自然条件下的不同砂粒含量土壤中存活行为的因素。并综合讨论土壤物理化学性质和土壤微生物群落结构及地理空间变量对大肠杆菌O157:H7存活行为的影响机制以及内在关系。结果表明,大肠杆菌O157:H7在土壤中的存活时间(ttds)分别为90.52天至27.04天不等。其中,土壤砂粒含量是影响大肠杆菌O157:H7存活行为的重要因素之一,回归分析结果显示,土壤砂粒含量与大肠杆菌O157:H7的存活时间呈显著负相关(P<0.001)。而土壤营养物质(土壤碳氮等)则与存活行为呈显著正相关(P<0.001)。除土壤性质外,土壤土著细菌群落也会影响大肠杆菌O157:H7的存活。我们的结果指出存活时间(ttd)与酸杆菌门(Acidobacteria)、绿弯菌门(Chloroflexi)、α-变形菌纲(Alphaproteobacteria)均显著相关(P<0.05)。非度量多维尺度分析(NMDS)结果表明不同砂粒含量土壤中细菌群落结构差异明显。多元逐步回归分析指出土壤粒径与总碳可能是影响大肠杆菌O157:H7的存活时间最主要的因素。结构方程模型(SEM)表明,土壤细菌群落可以直接影响大肠杆菌O157:H7的存活时间,而土壤粒径与地理空间距离更侧重于间接通过影响土著微生物群落来影响存活时间。此外,EC(土壤盐度)等土壤理化性质也会影响大肠杆菌O157:H7的存活。此外方差分解分析(VPA)表明,土壤的细菌群落、物理性质、化学性质对存活行为的单独解释量分别为5.63%、12.37%、15.38%。生物因素与非生物因素的相互作用可以更好地解释存活参数的变化动态的原因。综上,本次实验所采集土壤,具有空间地理距离较远,理化性质、微生物群落结构差异较大等因素,在评价大肠杆菌O157:H7的存活行为时,应考虑生物与非生物因素的相互作用,加深对内在机制的理解,结果应客观综合看待。
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