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目的:糖尿病肾病（diabetic kidney disease,DKD）是糖尿病（diatetes mellitus,DM）最常见的微血管并发症之一,已经成为终末期肾脏疾病首要疾病基础。微量白蛋白尿（microalbuminuria,MAU）被认为是DKD诊断的主要依据。但长期研究表明,MAU作为早期DKD的诊断指标,灵敏度差,特异性不高。研究发现,在DM前期的患者中,约13.1%的患者已出现MAU,即一部分DKD患者的肾损害可能在糖耐量异常（impaired glucose tolerance,IGT）期就已经发生。我们前期动物实验已证实,在IGT期肾脏已出现结构和功能的改变,因此,相对于DKD我们将这一阶段出现的肾损害称为“IGT肾病”[1]。尽管在动物实验中观察到在糖尿病前期已出现肾脏损害,但“IGT肾病”仍需在临床上进一步验证,其诊断依据以及发病机制还有待进一步探讨。研究发现多种早期诊断DKD的生物标志物,如:肝型脂肪酸结合蛋白（liver-fatty acid binding protein,L-FABP）、免疫球蛋白G（Immunoglobulin G,IgG）、肾损伤分子-1（kidney injury molecule-1,Kim-1）、β2-微球蛋白（β2-microglobulin,β2-MG）、胱抑素（Cysatin C,CysC）等,但这些标志物在“IGT肾病”是否有改变,也需在临床上进一步验证。通过蛋白组学-iTRAQ技术,筛选出差异候选蛋白Vasorin（VASN）。VASN是近年来新发现的一种蛋白,在肾脏中表达,VASN参与体内血管修复、肿瘤发生发展等过程。但VASN蛋白能否作为早期“IGT肾病”的生物标志物以及是否参与“IGT肾病”的发病机制也有待进一步研究证实。本研究从284名体检对象中随机抽取89名研究对象,分为健康对照组（NC）、IGT组、“IGT肾病”组（IGT nephropathy,IGTN）、2型糖尿病组（DM）、2型糖尿病肾病组（DKD）,观察不同人群肾损伤标志物、VASN等指标的变化,在临床上进一步验证IGT患者是否存在肾损伤以及VASN在“IGT肾病”中的诊断价值,并初步探讨VASN在“IGT肾病”发病机制中可能发挥的作用。方法:1.收集实验各组人群的一般资料及标本。检测血糖、血脂、肝肾功、胰岛素、24h尿微量白蛋白（urinarymicroalbumin,UMA）、视黄醇结合蛋白（retinol binding protein,RBP）、β2-微球蛋白（β2-microglobulin,β2-MG）、N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（N-acetyl-beta-D-glucosaminidase,NAG）、免疫球蛋白G（Immunoglobulin G,IgG）、转铁蛋白（Transferrin,TF）、L-FABP、Kim-1、CysC和VASN。检验VASN在“IGT肾病”中的变化及诊断价值。2.取课题组前期实验高脂饲料喂养Zucker Diabetic Fatty（fa/fa,ZDF）大鼠至IGT、DM阶段以及同龄健康Zucker Lean（fa/+,ZL）模型鼠的肾脏组织,检测VASN在肾脏的定位表达以及VASN的表达水平。3.以人肾小管上皮细胞为研究对象,分为正常对照组、缺氧组,检测VASN、硫氧还蛋白2（thioredoin 2,TRX2）、活性氧簇（Reactive oxygen species,ROS）水平以及对肾小管上皮细胞对白蛋白的重吸收的能力。4.分别用小干扰RNA（siRNA）、EX-I1533-M03质粒降低和过表达VASN,缺氧处理后,检测肾小管上皮细胞VASN、TRX2、ROS水平以及其重吸收功能的改变。结果:1.IGTN组肾小球滤过率（estimated glomerular filtration rate,eGFR）较NC组升高（P<0.05）;肾脏大小:IGTN组较NC、IGT组肾长径增加（P<0.05）。2.肾损伤指标:与NC组相比,IGTN组UMA、TF、CysC、GAL、NAG、NGAL、KIM-1、L-FABP均升高（P<0.05）。3.尿VASN:与NC组相比,IGTN组下降约27%（P<0.05）。4.在IGTN组,尿VASN与CysC、GAL、NAG、NGAL呈负相关,ROC曲线:对“IGT肾病”诊断的灵敏度为78.6%,特异度为64.7%（P<0.05）。5.免疫组化观察VASN在大鼠肾脏的表达情况:VASN主要分布于肾小管区。与正常对照组ZL大鼠相比,在ZDF大鼠IGT期、DM期VASN表达下降（P<0.05）。6.在缺氧状态下,与NC组相比,缺氧组VASN、TRX2表达水平下降,ROS生成增多近59%,白蛋白摄取下降约50%（P<0.05）。siRNA VASN组TRX2表达下降,ROS生成增多,升高近1.4倍,白蛋白摄取减少约70%;VASN过表达组TRX2的表达水平随之升高,ROS生成减少约56%,白蛋白摄取功能较缺氧组恢复近90%（P<0.05）。结论:1.在临床上进一步验证了IGT期部分患者存在肾脏损伤,表现为不同程度的肾小管及肾小球功能的损伤,肾小管损伤可能是此阶段更主要的病理生理变化。2.通过iTRAQ技术筛选出的差异蛋白VASN有望成为“IGT肾病”早期诊断新的标志物。3.VASN主要表达在肾小管间质区,在IGT、DM期大鼠肾脏表达下降。4.缺氧条件下,肾小管上皮细胞VASN的表达受到抑制,水平降低的VASN通过下调TRX2的表达,使细胞内ROS产生增加,加剧了肾小管上皮细胞的氧化应激损伤,导致其重吸收功能受损。