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副黏病毒科麻疹病毒属的犬瘟热病毒(CDV)的流行造成了在世界范围内的经济损失,并且其宿主范围的不断扩大,使得其危害越来越严重。虽然目前已有各种弱毒疫苗,但免疫后发病的现象还是时有发生,因此,研制安全有效的犬瘟热病毒疫苗,成为大家关注的问题。病毒的核蛋白是相对保守的蛋白,能够在早期引起机体强烈的抗体反应,可作为构建核酸疫苗的优先选择。而粒细胞-淋巴细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因在不同物种当中具有种属特异性,作为一种极具潜力的免疫佐剂,能够在多方面刺激机体的免疫水平。由于生存环境的改变,犬瘟热已经成为威胁大熊猫的疾病之一,但是却没有专门针对大熊猫犬瘟热病毒的疫苗存在。本实验旨在构建针对大熊猫的安全有效的犬瘟热核酸疫苗。本实验从犬瘟热感染的大熊猫眼拭子中扩增得到核蛋白基因,并首次从大熊猫外周血中扩增得到GM-CSF基因,将它们分别克隆到真核表达载体pCI-neo中构建了真核表达质粒pCI-N和pCI-G,并构建了通过linker相连的GM-CSF基因和核蛋白基因的真核重组质粒pCI-G-N。用100μL/只的剂量通过肌肉注射对小鼠进行免疫,以生理盐水和pCI-neo载体作为空白对照组,病毒油佐剂苗作对照组,监测免疫小鼠血清中CDV抗体含量,而T淋巴细胞的动态变化则通过外周血中IL-4和IFN-y含量的改变监测。结果显示,与空白对照相比,核酸疫苗能刺激机体产生较强的免疫应答,其中pCI-N+pCI-G免疫组小鼠体内的IL-4、IFN-y含量及血清中CDV抗体含量在免疫后56d分别达到82.54pg/mk317.32pg/mk249.57pg/ml。以上结果说明,重组质粒能在小鼠体内正常表达且构建的CDV核酸疫苗能够刺激机体产生CDV特异性抗体,而GM-CSF作为细胞因子佐剂能增强CDV核酸疫苗诱导的免疫应答。研究结果为CDV的新型基因重组疫苗的研究提供了理论和数据参考。