【摘 要】
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本实验以自行筛选得到的一株微生物菌株A2为试验菌种,以β-氨基丙腈为底物,采用静息细胞和固定化细胞生物转化工艺,生物催化水解生产β-氨基丙酸。采用离子交换技术,分离提取生物
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本实验以自行筛选得到的一株微生物菌株A2为试验菌种,以β-氨基丙腈为底物,采用静息细胞和固定化细胞生物转化工艺,生物催化水解生产β-氨基丙酸。采用离子交换技术,分离提取生物转化液中的β-氨基丙酸,获得了较佳的分离提取工艺条件。论文考察了游离静息细胞生物转化β-氨基丙腈生产β-氨基丙酸的工艺条件,结果表明:在磷酸盐缓冲液转化体系中,最佳转化温度为32℃,最佳转化pH为7.0,Zn2+和Cu2+对细胞转化呈明显抑制作用,而Ca2+对细胞转化有明显激活作用。在底物β-氨基丙腈浓度达到0.9%以后,随着底物浓度继续升高,酶活力开始下降,受到底物抑制作用,但是几乎不存在产物抑制。通过对转化动力学的研究和分析,得到了动力学参数的表观Vm(2.47×10-4mol/Lmin)和表观米氏常数Km(2.94×10-3mol/L)。利用固定化细胞技术进行了生物转化生产β-氨基丙酸的实验研究。用海藻酸钠包埋微生物细胞,以生理盐水(添加底物后用HCl调pH)作为转化体系,最佳转化pH为7.5,最佳转化温度为35℃。固定化细胞催化动力学参数的表观Vm为9.69×10-5mol/Lmin,表观米氏常数Km为3.94×10-3mol/L。与静息细胞生物转化工艺相比,固定化细胞可以明显增强酶的稳定性,固定化细胞被反复利用8次后酶活力仍然可以保存初始值的80.2%。对于产物β-氨基丙酸的分离纯化选择离子交换法来完成,通过WA-2氨基酸专用树脂和D201-FC强碱性阴离子交换树脂即可分离提取β-氨基丙酸。
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