番石榴多酚提取及抗氧化和抑菌活性研究

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番石榴作为一种高价值经济作物是在我国华南地区广泛种植,富含多酚类等天然活性成分,研究表明植物多酚具有抗肿瘤、抑菌和抗氧化等众多生理活性。为了充分利用番石榴资源,本文对番石榴多酚类物质的提取分离纯化、酚类成分的定量分析及其抗氧化和抑菌活性进行了初步研究。研究内容及结果如下:1、通过单因素试验确定响应面优化番石榴多酚的微波辅助提取试验因素,以此为基础优化提取工艺,用JMP软件分析数据表明其最佳提取时间为130s,最佳提取功率490W,最佳的料液比和乙醇体积分数分别为1:21(m:v)和50%,在此条件下番石榴多酚提取得率可达到1.78±0.38mg/g。2、利用NKA-9型大孔吸附树脂和SephadexLH-20型葡聚糖凝胶纯化分离番石榴多酚,得到4个不同组分GP1、GP2、GP3和GP4。采用特征颜色反应和紫外光谱(UV)相结合的方法初步确定各组分均为多酚类物质,用HPLC和UPLC-MS/MS进一步对其所含的简单酚类成分进行了定量分析,结果表明:番石榴多酚被NKA-9大孔吸附树脂纯化后纯度为45.7%,回收率为81%;没食子酸和儿茶素存在于各分离组分中,其次还有少量槲皮素、原儿茶酸、山奈素和绿原酸等简单酚类成分;GP1中没食子酸含量最高(69.4mg/kg),其次是儿茶素(23.99mg/kg),山奈素含量最低,GP1中的绿原酸为4个组分中的特有成分;GP2中没食子酸含量在4个组分中最高(529.74mg/kg);GP3中儿茶素(2191.49mg/kg)含量均高于其它组分,但山奈素含量(0.25mg/kg)低于另外3个组分;槲皮素只存在于GP4中,为32.38mg/kg。3、以抗坏血酸(Vc)为阳性对照,选取总抗氧化能力以及羟自由基清除活性、超氧阴离子自由基清除活性和DPPH自由基清除活性这4个指标评价番石榴粗多酚(CGP)、大孔吸附树脂纯化多酚(PGP)和各分离组分的抗氧化能力。结果表明:番石榴多酚的总抗氧化能力大小为GP4>Vc>GP3>GP2>PGP>CGP>GP1;番石榴多酚能有效地对影响生理代谢的羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基这三大活性基团进行清除,其浓度在一定范围内和清除能力成线性关系;番石榴多酚对各个自由基的清除作用不具有一致性,CGP和GP1对羟自由基清除效果最好,PGP对DPPH和超氧阴离子自由基清除能力强于其它组分;番石榴多酚对DPPH自由基的半抑制浓度最低,其次为羟自由基。4、以抑菌圈直径为评价指标,测定了番石榴多酚的抑菌活性,并以金黄色葡萄球菌为指示菌,对其抑菌稳定性进行了研究,结果表明:番石榴多酚对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏杆菌、单增李斯特菌、铜绿假单胞菌、腐败希瓦氏菌和枯草芽孢杆菌具有较好的抑制效果,除了单增李斯特菌和腐败希瓦氏菌的MIC低于5mg/mL外,其余均低于2.5mg/mL。番石榴多酚在pH为4~5范围内的抑菌活性最强,其抑菌活性对温度、紫外照射具有稳定性,低盐度会促进其抑菌活性。
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