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目的：从日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA中扩增出日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)编码基因，克隆至原核表达载体，并表达出重组蛋白；利用该重组蛋白的鼠源单克隆抗体(McAb)探讨天然Sj14-3-3在日本血吸虫体内的定位；制备重组日本血吸虫14-3-3(rSj14-3-3)蛋白质分子疫苗，同时制备其真核表达载体(pBK-CMV)核酸疫苗，观察两种分子疫苗在BALB／c小鼠中抗血吸虫感染的免疫保护作用，从干扰虫体信号转导途径角度寻找新的血吸虫疫苗候选分子，同时探讨Sj14-3-3、日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶(SjGST)两种重组蛋白和其DNA作为疫苗的协同作用，同时观察一种结核杆菌低分子量耐热多肽(Mtb)作为佐剂激活的γδ-T细胞在抗血吸虫中的作用；在以上研究的基础上，探讨rSj14-3-3用于诊断日本血吸虫病的价值。方法：提取日本血吸虫成虫总RNA，再富集mRNA，逆转录生成cDNA，然后以其为模板扩增出Sj14-3-3编码基因，将扩增产物克隆入原核表达载体pET28a。在原核细胞表达rSj14-3-3蛋白。制备血吸虫雌、雄成虫和15日龄童虫冰冻切片，间接免疫荧光法研究14-3-3在虫体内的分布。制备、纯化rSj14-3-3和rSjGST蛋白抗原，分别以福氏佐剂和Mtb为佐剂免疫BALB／c小鼠，同时，大量制备、纯化pBK-CMV／Sj14-3-3、SjGST重组真核表达质粒，肌肉注射免疫BALB／c小鼠，观察它们的抗血吸虫感染作用。利用纯化的rSj14-3-3抗原，间接ELISA法探讨其诊断日本血吸虫病的价值。结果：PCR扩增出一具有765bp完整开放读码框的DNA片段，成功地将其克隆入pET28a；将pET28a／Sj14-3-3做女徽医科人学硕卜学位论文BamHI和Xhol双酶切，能得到一个大小与PCR扩增产物一致的插入片段;用IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌BL2.(DE3)，可得到犯.skDa的融合蛋白。融合蛋白可被鼠源rsj 14一3一3单克隆抗体、血吸虫感染的兔血清、抗14一3一3 ePsilon多克隆抗体、日本血吸虫病人血清和紫外线致弱尾蝴免疫的鼠血清识别;间接免疫荧光结果显示:14一3一3主要定位在血吸虫雌、雄成虫和巧日龄童虫的皮层、皮下层、肌层和实质层;用Sj14一3一3重组多肤疫苗和核酸疫苗免疫BALB/c小鼠，减虫率:rsj 14一3一3十福氏佐剂组为犯.20%;rsj 14一3一3+r SjGST+福氏佐剂组为31 .10%:rsj 14一3一3+Mtb佐剂组为27.96%;rsj 14一3一3+rsjGST+Mtb佐剂组为26.00%;rsjGST+Mtb佐剂组为27.10%;rsj14一3一3 DNA组为34.20%;rsjl4一3一3+rsjGSTDNA组为32.40%;各组的减卵率分别为(按以上组序)50.40%、53.30%、51.10%、55.60%、5 1 .30%、50.74%和55，23%;lbJ接ELISA结果显示，rsj 14一3一3作为抗原检测急、曼性日本血.吸虫病可获得很高的敏感性和特异性，具有实用价值。结论:本研究成功地扩增、克隆和表达了Sj14一3一3，确定了其在血吸虫体内的大致分布，基因一〔程疫苗和核酸疫苗免疫小鼠也获得了一定的免疫保护作用，表明Sj14一3一3重组蛋白和其DNA具有一定的抗血吸虫病潜能，有可能作为日本血吸虫病的候选疫苗分子，但未见Sj14一3一3、sjGST两种重组蛋白及其DNA的协同作用;Mth激活扩增的Y6一T细胞在抗血吸虫免疫中有一定的作用，效果与福氏佐剂产生的免疫作用类似;间接ELISA表明，rsj 14一3一3在血吸虫病诊断中具有实用价值。