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第一部分UHRF1在有氧状态下与磷酸甘油激酶-PGKl结合促进乳腺癌细胞的磷酸戊糖途径代谢目的：通过免疫沉淀结合质谱鉴定,寻找UHRF1未知的相互作用蛋白,进一步研究UHRF1在乳腺癌中的生物学功能。方法：(1)构建N端带有FLAG标签的UHRF1过表达的慢病毒载体,包装成病毒,感染MCF-7细胞并经筛选后,获得稳定表达外源FLAG-UHRF1的MCF-7细胞株；(2)免疫沉淀技术结合质谱鉴定,获得与UHRF1相互作用的候选蛋白；(3)在质谱结果中挑选在乳腺癌发生发展过程中可能起一定作用的候选蛋白PGK1,并用免疫共沉淀技术验证与UHRF1的相互作用；(4)稳定干扰UHRF1,在有氧和缺氧状态下检测乳腺癌细胞内葡萄糖摄入量,NADPH的生成量和培养基中乳酸积累的变化,研究UHRF1与PGK1的结合对葡萄糖代谢途径的影响。结果：(1)获得稳定表达FLAG-UHRF1的乳腺癌细胞MCF-7；(2)免疫沉淀结合质谱鉴定,筛选出候选相互作用蛋白fattycid synthase、Myosin-9、 UHRF1BP1、OGT1、DDX5、PGK1、Actin-alpha、Actin-beta、PRDX1、PRDX2;(3)磷酸甘油激酶一PGK1是葡萄糖的糖酵解代谢途径的关建酶,外源性和内源性免疫共沉淀证明UHRF1与PGK1的相互作用；(4)在乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中干扰UHRF1,葡萄糖的糖酵解代谢途径产物乳酸积累增加,但细胞对葡萄糖的摄入量没有明显变化,而葡萄糖的磷酸戊糖代谢途径产物NADPH积累降低；而在缺氧条件下,虽然PGK1表达上调,敲除UHRF1,对MCF-7和MDA-MB-231细胞系的葡萄糖摄入,乳酸积累和NADPH产生都没有显著影响,同时在缺氧状态下没有发现UHRF1与PGK1的相互作用。结论：发现了UHRF1新的相互作用蛋白PGK1,乳腺癌细胞在有氧状态下,通过UHRF1与PGK1结合,促进葡萄糖的磷酸戊糖代谢。第二部分缺氧条件下脯氨酸羟化酶一EGLN2与UHRF1结合促进葡萄糖的糖酵解途径代谢目的:研究在缺氧条件下,UHRF1失去与PGKl相互作用的机制,及其对葡萄糖代谢的影响。方法：(1)在缺氧条件下,通过免疫沉淀结合质谱鉴定缺氧条件下特异性结合UHRF1的蛋白：脯氨酸羟化酶-EGLN2；(2)免疫共沉淀技术验证缺氧条件下UHRF1与EGLN2的相互作用；(3)稳定干扰EGLN2,研究UHRF1与PGK1在缺氧状态的相互作用,同时检测在缺氧状态下乳腺癌细胞的葡萄糖摄入量,NADPH的生成量和培养基中乳酸积累的变化；(4)通过小牛肠碱性磷酸酶去磷酸化实验,检测UHRF1是否有磷酸化的翻译后修饰,UHRF1的磷酸化是否影响有氧状态下与EGLN2的相互作用。结果:(1)免疫沉淀结合质谱鉴定出UHRF1在缺氧条件下的候选结合蛋白：作为氧感受器的脯氨酸羟化酶-EGLN2;(2)半外源性和内源性免疫共沉淀明确了缺氧条件下UHRF1与EGLN2的相互作用,而在有氧条件下UHRF1不与EGLN2结合；(3)干扰EGLN2的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231,在缺氧状态下,葡萄糖的糖酵解代谢途径产物乳酸积累降低,细胞对葡萄糖的摄入量没有明显变化,而葡萄糖的磷酸戊糖代谢途径产物NADPH积累增加；同时发现干扰EGLN2后,UHRF1与PGK1在缺氧状态下恢复了相互作用；(4)小牛肠碱性磷酸酶去磷酸化实验提示UHRF1在有氧状态下存在磷酸化修饰,而去磷酸化处理后,JHRF1恢复了有氧状态下与EGLN2的结合。结论：发现UHRF1在缺氧状态下与EGLN2结合,EGLN2与UHRF1的结合阻碍了其与PGK1的结合,干扰EGLN2后能恢复UHRF1与PGK1的结合,并促进了葡萄糖的磷酸戊糖代谢；有氧状态下,UHRF1的磷酸化阻碍了其与EGLN2的结