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目的采用冲击诱导法构建紫杉醇耐药株SKBR3/PR和MCF-7/PR,检测STAT5基因沉默及过表达对人乳腺癌细胞SKBR3和MCF-7紫杉醇化疗耐药性的影响。探讨STAT5在乳腺癌中的作用及细胞周期相关因子cyclin B1、CDK2和c-myc在细胞耐药中的分子机制,以期为乳腺癌临床治疗提供新的思路。方法构建紫杉醇耐药株SKBR3/PR和MCF-7/PR,检测STAT5蛋白表达情况;采用STAT5特异性sh RNA转染SKBR3/PR和MCF-7/PR细胞,检测SKBR3/PR-sh RNA和MCF-7/PR-sh RNA对紫杉醇的敏感性;通过STAT5过表达脂质体载体及sh RNA转染SKBR3和MCF-7细胞,MTS法和FCM法检测紫杉醇化疗对SKBR3-STAT、SKBR3-STAT-sh RNA、MCF-7-STAT和MCF-7-STATsh RNA细胞生存率和凋亡率的影响,用q PCR法及Western blot法检测细胞周期调控蛋白cyclin B1,CDK2和c-myc表达。结果1、SKBR3和MCF-7组细胞随紫杉醇浓度(>5n M)增加,细胞存活率降低,呈剂量依赖性(t=2.476~5.653,P<0.05;t=2.309~8.591,P<0.05)。而SKBR3/PR组细胞在紫杉醇浓度为80n M时稳定生长,MCF-7/PR组在640n M紫杉醇中稳定生长。紫杉醇处理SKBR3和MCF-7的最佳剂量分别为80n M和640n M。2、SKBR3/PR和MCF-7/PR组细胞中STAT5表达量高于SKBR3和MCF-7组(t=7.027,P=0.000;t=6.242,P=0.000)。分别用80n M和640n M紫杉醇处理SKBR3/PR-sh RNA和MCF-7/PR-sh RNA细胞24h、48h、72h,MTS结果显示,SKBR3/PR-sh RNA和MCF-7/PR-sh RNA组细胞各时间点化疗敏感性均高于耐药组(t=2.638~7.905,P<0.05;t=2.360~6.207,P<0.05)。3、紫杉醇(80n M/640n M)作用于SKBR3-STAT5和MCF-7-STAT5组细胞7d,结果显示SKBR3-STAT5和MCF-7-STAT5组细胞紫杉醇敏感性显著低于SKBR3和MCF-7细胞组(t=2.532~4.109,P<0.05;t=2.297~3.254,P<0.05);而STAT5沉默后,SKBR3-STAT5-sh RNA和MCF-7-STAT5-sh RNA组细胞化疗敏感性均较SKBR3和MCF-7细胞组增强(t=2.275~4.967,P<0.05;t=2.413~5.779,P<0.05)。FCM检测结果显示,SKBR3-STAT5和MCF-7-STAT5组细胞凋亡率为低于SKBR3和MCF-7组(t=3.248,P=0.004,t=4.517,P=0.001)。SKBR3-STAT5-sh RNA和MCF-7-STAT5-sh RNA组细胞凋亡率显著高于SKBR3和MCF-7组(t=2.395,P=0.027,t=2.505,P=0.019)。4、STAT5过表达SKBR3-STAT5和MCF-7-STAT5组cyclin B1,CDK2和c-myc蛋白和m RNA水平较比SKBR3和MCF-7组均上调(P<0.01)。而沉默STAT5后,与SKBR3和MCF-7组比较,SKBR3-STAT5-sh RNA和MCF-7-STAT5-sh RNA组cyclin B1,CDK2和c-myc蛋白和m RNA表达降低(P<0.01)。结论1、STAT5表达情况与乳腺癌细胞紫杉醇化疗敏感性具有负向相关性。2、STAT5基因调控细胞周期相关因子cyclin B1、CDK2和c-myc基因水平和蛋白表达,进而介导乳腺癌细胞紫杉醇耐药。