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目的:通过研究牙槽嵴粘骨膜不同扩张时期中MVD变化和EGFR的表达,以探讨扩张过程中微循环及EGFR的变化特征,为临床改良扩张方式、缩短扩张时间提供理论依据。
方法:
1.实验动物:15只雄性新西兰大白兔,6月龄,体重2~3Kg,由中山大学医学动物实验中心提供。
2.动物分组:随机将动物按不同扩张方式分为5大组:A组(植入不扩张组)、B组(第1次扩张组)、C组(第2次扩张组)、D组(第3次扩张组)和E组(第4次扩张组)。A组植入扩张器不扩张。B、C、D、E组均在扩张器植入术2周后开始注水0.5ml扩张牙槽嵴粘骨膜,每间隔1周注水0.5ml扩张。
3.动物模型制备:实验动物称重,2.5g/L戊巴比妥钠静脉麻醉(25mg/Kg)。麻醉显效后,动物仰卧位固定,常规消毒口腔、铺无菌巾。于双侧下切牙后1cm处切开牙槽嵴骨膜,限制性掀起粘骨膜瓣,充分暴露植入区牙槽嵴,生理盐水和庆大霉素液冲洗,切口远中侧缝线用于牵引,以利术中能直视下平整置入预制扩张器。植入前自注射壶注射无菌生理盐水检查扩张器有无渗漏。在术区植入扩张器后,生理盐水冲洗,严密缝合手术切口。注射壶固定在颏部皮肤,检查无松脱后。自注射壶抽出扩张器内空气,至不能用注射器抽动。
4.标本采集及处理:A扩张器植入后2周处死动物留取标本。B、C、D、E组分别于第1、2、3、4次注水后维持1周后处死动物留取标本。F组随机选取3只动物非手术区牙槽嵴粘骨膜作为空白对照组。采集扩张区牙槽嵴粘骨膜标本。随机选取3只动物非手术区牙槽嵴粘骨膜作为空白对照组(F组)。标本投入10%甲醛液中固定,常规脱水、透明、浸蜡、包埋,制成4μm连续切片。
5.观察指标及方法:
5.1大体标本肉眼观察;
5.2光镜HE染色组织学观察;
5.3采用免疫组化SP法及计算机图像分析系统检测CD31和EGFR在扩张粘骨膜中的表达。
6.采用SPSS11.5统计软件包进行统计学处理,以P<0.05为具有统计学意义。
结果:
1.大体观察:
动物实验过程中,所有实验动物未出现感染、扩张器外露、粘骨膜坏死等并发症,均成活到预定观察时间。
2.组织学观察:
B、C、D、E四组在不同扩张期,血管增生明显,主要集中于固有层、粘膜下层。固有层均有炎症细胞浸润。
3.CD31表达及微血管密度(MVD):
A组及F组微血管密度处在较低水平。B、C、D、E四组在维持1周后微血管密度均处于较高水平,随着扩张时间的延长,微血管密度呈下降趋势,B组的MVD明显高于C组、D组、E组,B组与C组、D组、E组比较有统计学意义(P<0.05)。C组、D组、E组三组间比较无统计学意义(P>0.05)。A组与F组比较无统计学意义(P>0.05)。
4.EGFR的表达:
A组EGFR表达处在较低水平。B、C、D、E四组在维持1周后EGFR表达均处于较高水平,随着扩张时间的延长,EGFR表达呈下降趋势,B组的EGFR表达明显高于C组、D组、E组,A组与F组比较明显差别。
结论:
1.粘骨膜扩张可明显增加扩张粘骨膜中微血管密度,在扩张初期微血管密度增加明显,在后期密度增加不如初期明显,但血管管腔增大。
2.粘骨膜扩张可明显增加扩张粘骨膜中EGFR表达,在扩张初期尤为明显,在后期密度增加不如初期明显。推测如在扩张区应用外源性EGF制剂,可增加扩张组织生长速度,缩短扩张时间。但仍需进一步实验证实。