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目的:探讨尖吻蝮蛇毒组分I(Agkistrodon acutus venom component-I,AAVC-I)诱导人口腔鳞癌Tca8113细胞内质网凋亡通路的作用。方法:本实验选择Tca8113细胞作为研究对象,体外条件下进行培养传代。1、根据实验需求运用内质网应激诱导剂DTT(二硫苏糖醇)作参照,采用倒置显微镜观察不同浓度、不同时间段DTT及AAVC-I作用后细胞形态改变,以筛选尖吻蝮蛇毒组分I(AAVC-I)诱导人口腔鳞癌Tca8113细胞可能发生内质网应激反应的最佳浓度范围及作用时间;2、MTT法检测不同浓度、不同时间段AAVC-I及DTT作用后Tca8113细胞增殖抑制率的变化;3、实验分组,设置正常对照组、实验组(依次将不同浓度的AAVC-I 3.125μg/m L、6.25μg/m L、12.5μg/m L作用于Tca8113细胞),正常培养12h、24h后运用RT-PCR技术、Western blotting法分别检测不同时间段内质网应激特异性指标CHOP、GRP78、Caspase-4在m RNA水平及蛋白水平的表达情况;4、采用免疫细胞化学法定性检测不同浓度AAVC-I作用下CHOP、GRP78、Caspase-4在细胞内的表达;5、RT-PCR技术、流式细胞术检测运用CHOP抑制剂后AAVC-I诱导内质网应激反应发生时CHOP、GRP78、Caspase-4表达情况及细胞凋亡率的改变。结果:1、倒置显微镜观察发现正常组Tca8113细胞贴壁生长,形状为多边形或梭形,胞质密度均匀,DTT组随着DTT(1mmol/L、2mmol/L、4mmol/L、8mmol/L)浓度的增加及作用时间(2h、4h)的延长,半贴壁细胞逐渐增加,细胞皱缩变圆,细胞间隙变大,胞质密度增加,AAVC-I组(3.125μg/m L、6.25μg/m L、12.5μg/m L、25μg/m L),随着AAVC-I浓度的增加及作用时间(12h、24h)的延长,Tca8113细胞多数呈圆形,体积变小,半贴壁及悬浮细胞增加,细胞融合抱团,细胞间分界不清楚;2、MTT法检测表明,两实验组DTT组(1mmol/L、2mmol/L、4mmol/L、8mmol/L 2h、4h)及AAVC-I组(3.125μg/m L、6.25μg/m L、12.5μg/m L、25μg/m L12h、24h)随着药物浓度的增大及作用时间的延长,细胞的增殖抑制率呈上升趋势(P<0.05);3、RT-PCR技术、Western blotting法检测结果提示低浓度AAVC-I组内质网应激指标CHOP、GRP78、Caspase-4较正常对照组表达增加,中、高浓度AAVC-I组CHOP、GRP78、Caspase-4表达量较正常对照组增加明显(P<0.05);4、免疫细胞化学法染色发现CHOP、GRP78、Caspase-4随AAVC-I浓度增大、作用时间延长,表达均上调(P<0.05);5、运用CHOP抑制剂表阿霉素后,RT-PCR法检测CHOP、GRP78、Caspase-4表达量减少,流式细胞仪检测结果,AAVC-I+表阿霉素组与AAVC-I组比较细胞凋亡率下降。结论:1、成功筛选出DTT诱导内质网应激反应的浓度及作用时间;2、以DTT为阳性对照,一定浓度范围的AAVC-Ⅰ有可能诱导Tca8113细胞发生内质网应激反应;3、低浓度AAVC-Ⅰ可使Tca8113细胞适应或发生轻度的内质网应激反应,中、高浓度AAVC-Ⅰ持续过度刺激诱导Tca8113细胞发生应激反应;4、表阿霉素能抑制CHOP因子表达,CHOP途径有可能是AAVC-Ⅰ内质网通路诱导Tca8113细胞凋亡的途径之一。