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目的:研究局部运用中药提取物骨碎补总黄酮填充修复健康成年家兔膝关节关节软骨全层缺损的可行性和部分作用机理。 方法:选择成年健康新西兰家兔72只,随机分为三组,每组各24只48个关节,其中A组为实验组,B组为观察组、C组为对照组。参照目前国内比较公认的王立春关节软骨缺损造模法,沿膝关节内侧髌骨内侧缘做皮肤切口,逐层切开显露膝关节,显露股骨内髁关节面,用限制钻头钻孔在实验动物膝关节股骨内髁滑车面上做一直径3mm、深3mm的软骨全层缺损区,直至软骨下骨渗血。冲洗关节腔及软骨缺损区后,三组分别给予不同的填充处理,其中A组予以骨碎补总黄酮凝胶、B组予以明胶/骨形态发生蛋白复合物凝胶填充,C组予以明胶凝胶填充,作空白对照。于造模术后2、4、8周分别取8只实验动物的膝关节造模标本行大体观察、HE和甲苯胺蓝染色、改良Pineda法组织学评分[2]、Ⅱ型胶原免疫组化和原位杂交方法、检测IL-1和TNF-α的表达水平并进行评估。 结果:经研究发现,A组骨碎补总黄酮组和B组明胶/BMP复合物组在造模术后的第2周、第4周、第8周缺损区填充均优于明胶组,为乳白色质软类透明软骨组织;组织学评分与明胶组存在极显著性差异(P<0.01),用药组之间没有统计学意义(P>0.05)。关节软骨缺损区修复组织经Ⅱ型胶原免疫组化、原位杂交检测定性。用药组Ⅱ型胶原的表达在术后2、4、8周与明胶组比较,均有极显著性差异(P<0.01),用药组之间比较没有统计学意义(P>0.05)。用药组IL-1水平在术后第4周、第8周与术后2周比较明显改变(P<0.01),两组均在4周时明显上升,在术后第8周发现,骨碎补总黄酮组IL-1水平较术后第4周的水平明显下降,而此时明胶/BMP组则较术后第4周水平继续增高。用药组TNF-α水平在术后第2周显著上升达到最高峰,随后不断下降,在术后第4周、第8周,两用药组TNF-α较术后第2周的水平明显下降(P<0.01),与明胶组无明显区别(P>0.05)。 结论:骨碎补总黄酮局部运用可以填充修复家兔膝关节软骨缺损,可能是在多种细胞因子的联合作用下,通过促进Ⅱ型胶原mRNA表达等方式实现的,经组织学观察修复组织以透明软骨为主,接近正常关节软骨。其修复关节软骨缺损是可行的,具有很好的实用价值和临床应用前景。