【摘 要】
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ω-转氨酶属于转氨酶家族中第三类,是转氨酶家族中唯一一类可以转移氨基酸非α位上氨基的酶。非α手性胺是很多重要的药物中间体,通过化学方法合成通常成本高,污染大,光学纯
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ω-转氨酶属于转氨酶家族中第三类,是转氨酶家族中唯一一类可以转移氨基酸非α位上氨基的酶。非α手性胺是很多重要的药物中间体,通过化学方法合成通常成本高,污染大,光学纯度较低。通过ω-转氨酶生物催化合成非α手性胺可以克服化学合成手性胺的一些缺点,成为手性胺合成领域的新方法。本实验运用生物信息学技术从三株嗜热芽孢杆菌中找到3个可能的ω-转氨酶氨基酸序列。通过分子克隆技术成功构建三个酶的大肠杆菌表达体系。诱导表达后运用亲和层析方法纯化目的蛋白。对三个转氨酶的基本酶学性质做了表征。结果表明其最适催化pH为9.0,最适催化温度在65℃或55℃,50℃环境下酶活可保持8h以上不降低。其中TA-465对牛磺酸的Km值约为15 mM,对(S)-(-)-α-甲基苄胺的Km值约150 mM,通过文献比较表明三个酶均属于ω-转氨酶家族中的牛磺酸转氨酶。底物谱的测定表明三个转氨酶均是S构型选择性的,对醛类和多羟基糖类受体有较强的活性。氨基受体羰基碳的a位上的羟基能明显增强受体的活性,这可能是由于其对羰基碳的吸电子作用导致羰更容易受到氨基供体-PMP的亲核进攻导致的,这使其对多羟基的糖类物质活性比其他转氨酶来得高。本课题通过对三株嗜热酶的基础研究,为其后续的催化应用打下实验基础。
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