为阐明甲基法呢酯在中华绒螯蟹卵巢发育中的调控作用。离体培养法研究了去眼柄（Eyestalk ablation, ESA）不同天数后的中华绒螯蟹大颚器以及X-器官窦腺对卵巢发育的影响。将大颚器与离体卵母细胞共培养作为实验组1，大颚器和X-器官窦腺与卵母细胞共培养作为实验组2，仅添加培养培养液作为对照组。通过测量卵母细胞直径的变化探讨大颚器对卵巢发育的影响。另外切除中华绒螯蟹眼柄诱发大颚器活性，通过检测ESA处理不同天数的大颚器中法呢酸甲基转移酶以及性腺中卵黄蛋白原基因表达量的变化探讨去眼柄对大颚器以及性腺发育的影响。用活体注射法，分别使用0.5μg/mL和1μg/mL甲基法呢酯各20μL连续5天活体注射中华绒螯蟹，测定血淋巴和性腺中Na~+/K~+-ATP酶活力。离体培养法研究了甲基法呢酯对性腺中卵黄蛋白原mRNA表达的影响，在离体培养的中华绒螯蟹卵母细胞培养液中加入10-8mol/L甲基法呢酯，荧光定量PCR法分析卵黄蛋白原基因的相对表达情况。此外，本实验中使用蛋白激酶C激动剂或抑制剂处理中华绒螯蟹离体培养的卵母细胞。通过测定卵黄蛋白原mRNA表达的变化情况初步探讨甲基法呢酯促进性腺发育的信号传导途径。通过上述实验得到以下结果。1.去眼柄后对中华绒螯蟹卵母细胞发育的影响去眼柄后1，3，6，14天的大颚器分别培养中华绒螯蟹卵母细胞24小时，均能够极显著地促进中华绒螯蟹卵母细胞的发育（P<0.01）。且ESA处理第6天的大颚器的促进作用最强。加入X-器官窦腺复合体和ESA处理不同天数的大颚器培养卵母细胞。ESA处理第1，3天的大颚器对卵母细胞直径影响同对照组相比没有显著性差异（P>0.05）。同对照组相比，ESA处理第6，14天的大颚器使卵母细胞直径极显著增加（P<0.01）。ESA处理相同天数的大颚器培养卵母细胞，由于实验组2加入X-器官窦腺复合体，同实验组1相比其卵母细胞的直径均明显减小（P<0.01）。大颚器中的功能性物质能够促进卵母细胞发育，X-器官窦腺能够抑制离体卵母细胞的发育。2.去眼柄后对法呢酸甲基转移酶以及卵黄蛋白原mRNA表达量的影响ESA处理后大颚器中法呢酸甲基转移酶mRNA表达水平呈上升趋势。以未去眼柄的中华绒螯蟹法呢酸甲基转移酶mRNA表达丰度作为对照组，在ESA处理后的1天和3天其表达丰度同对照组相比无显著性差异（P>0.05），然而第6和14天表达丰度同对照组相比极显著上升至265%(P<0.01)。ESA处理后，与对照组相比性腺中VTG mRNA被显著诱导，随着时间的增加，诱导效果增加。ESA处理后第6天，VTG mRNA表达量是对照组的545.62倍。X-器官窦腺复合体能够抑制大颚器中法呢酸甲基转移酶以及性腺卵黄蛋白原基因表达。3.注射甲基法呢酯对Na~+/K~+-ATP酶活力的影响给中华绒螯蟹注射0.5μg/mL和1μg/mL甲基法呢酯各20μL。5天后，实验组血淋巴中的Na~+/K~+-ATP酶活力明显高于对照组，其中0.5μ g/ml实验组Na~+/K~+-ATP酶活力较对照组提高88%，差异显著（P<0.01）；1μ g/ml实验组Na~+/K~+-ATP酶活力，约为对照组2.87倍，差异显著（P<0.01）。注射甲基法呢酯能够促进血淋巴Na~+/K~+-ATP酶活性的增加。实验组性腺中Na~+/K~+-ATP酶活力明显高于对照组。同对照组相比，0.5μ g/ml组Na~+/K~+-ATP酶活力上升了48.2%，差异显著（P<0.01）；1μ g/ml组约为对照组1.83倍，差异显著（P<0.01）。说明在体注射甲基法呢酯能够促进性腺中Na~+/K~+-ATP酶活性。4.甲基法呢酯对中华绒螯蟹性腺中卵黄蛋白原表达的影响体外培养中华绒螯蟹卵母细胞。与对照组相比，在培养液中加入10-8mol/L甲基法呢酯能够有效的促进卵黄蛋白原mRNA的表达（P<0.01）。0.5μmol/L蛋白激酶C激动剂PMA使卵黄蛋白原mRNA表达量下降（P<0.05）。而0.5nmol/L蛋白激酶C抑制剂Staurosporine能够卵黄蛋白原mRNA表达量上升，但是差异不显著（P>0.05）。加入5×10-11mol/L MF以及0.5μmol/L PMA同仅加入0.5μmol/L PMA相比，卵黄蛋白原mRNA表达量显著上升（P<0.01）。该结果表明甲基法呢酯能够促进性腺中卵黄蛋白原基因的表达，PKC失活是参与卵黄蛋白原表达的一个可能途径。