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目的:富血小板血浆(PRP,platelet-rich plasma)及其激活产物富血小板凝胶(PRG,platelet-rich gel)是血液高度浓缩的产物,由于其富含大量的生长因子,在临床上广泛应用于各种软组织的修复。研究表明,血小板可以通过多种方式发挥抗感染效应,然而在诸多的体外研究中,我们发现PRP对某些常见细菌(如大肠杆菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌和肺炎克雷伯杆菌)的抗菌作用结论并不一致。最新有研究认为PRP对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA,methicillin-resistant staphylococcus aureus)也有抗菌效应。本研究拟通过体外抑菌实验,明确健康志愿者全血制备的PRP及其衍生物PRG在体外对MRSA临床菌株有无抗菌效应,初步了解PRP在MRSA感染中的应用价值以便指导临床。方法:获取MRSA临床菌株,接种于哥伦比亚血琼脂平板中,使用营养肉汤于恒温振荡器中增菌后备用。使用含枸橼酸钠的蓝色盖头一次性采血管采集6名健康志愿者肘前静脉血各9ml,在常温下通过手工二次离心法(第一次300×g 10min,第二次700×g 10min)制备PRP,充分摇匀后全自动血细胞分析仪计数全血及PRP中血小板数目。通过分光光度计测定增菌后的菌悬液OD600值,根据OD600值调整细菌浓度,采用预加菌液倾注平板法,用冷却至45℃的MH琼脂培养基(Mueller-Hinton Ager)与MRSA混合后制备20个带菌平板,每个平板均分为4个区域,使用牛津杯打孔法于每个区域正中打孔,挑去孔中培养基后进行体外抑菌实验。每个培养皿中4个孔,分为A、B、C、D四组,A组阳性对照组加入50ul硫酸庆大霉素溶液、B组PRP组加入50ul PRP、C组PRG组加入50ul PRP+5ul葡萄糖酸钙-凝血酶溶液(现用现配)、D组阴性对照组加入50ul灭菌纯水。将培养皿正面朝上放入37℃恒温培养箱中培养12h后取出,用游标卡尺十字交叉法测量各组抑菌圈大小,SPSS 18.0统计软件行统计分析,计量资料使用均数±标准差表示,各组间P值<0.05有统计学意义。结果:6名健康志愿者全血及PRP中血小板数目分别为(161±19.2)×109/L,(876.3±73.3)×109/L,PRP中血小板富集倍数平均为5.4倍,符合PRP制备标准。MRSA于营养肉汤中增菌后测得菌悬液OD600值为1.375,经过倍比稀释后测得细菌悬液OD600值为0.534,再经涂布计数测得稀释后细菌浓度为1.76×109CFU/ml,而对应配置的MH琼脂平板中MRSA的接种细菌浓度为1.76×106CFU/ml。共培养12h后取出可见培养基中细菌分布均匀,抑菌圈边缘规则,边界清晰,识别度高。硫酸庆大霉素溶液组可见到明显抑菌圈出现,其平均抑菌圈直径为(17.15±0.96)mm,PRP组、PRG组、灭菌纯水组抑菌圈直径均为0 mm。结论:1.打孔法与预加菌液倾注平板法结合在PRP的抑菌实验中是一种可行的、简单实用、重复性高的抑菌实验方法。2.健康志愿者静脉全血制备的PRP及PRG对本实验中MRSA临床菌株暂未发现抗菌效应,尽管不断有研究认为PRP可以抑制许多细菌的生长,但在临床实际中,对于某些耐药菌株,这种效应可能是非常微弱的,我们不能夸大了PRP的抗感染效应而忽视了某些感染性疾患本身的治疗。