朱砂根皂苷酶的研究

来源 :大连轻工业学院 大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fengniao1625
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本论文主要研究以朱砂根为原料,利用微生物酶法,使朱砂根总皂苷酶解,得到活性更高的朱砂根皂苷,对能水解朱砂根总皂苷的朱砂根皂苷酶进行了酶性质的研究,同时利用硅胶柱层析法对朱砂根总皂苷酶解产物进行了分离提纯。   通过对产朱砂根皂苷酶的菌株筛选,本实验选择实验室保藏菌种sp.S48r为朱砂根皂苷酶的生产用菌,同时确定菌株的诱导发酵培养条件为含25%诱导物的5°麦芽汁为培养基,在30℃生化培养6天。   朱砂根皂苷酶经DEAE-Cellulose离子交换柱分离提纯,实验表明,第52管提纯酶液酶活力最高,将其做SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,确定其分子量为80kDa。   为了得到产率和质量较高的朱砂根皂苷,本实验进行了一系列研究来探索酶反应的最佳底物浓度、最佳温度、最佳pH及最佳反应时间。通过薄层层析法,确定朱砂根皂苷酶反应最佳底物浓度为0.5%,最佳温度为40℃,最佳pH为5.0,最佳反应时间为24hr。   确定了酶反应最适条件后,称取4g底物在最适条件下进行大型酶反应,每隔一定时间点板分析,直至反应完全后,终止反应,然后用大孔吸附树脂对酶反应混合物进行吸附、脱色处理,最后于70℃水浴锅上蒸干成粉末状,称重3.42g。   利用硅胶柱层析法对酶反应混合物进行分离提纯,收集酶反应后新朱砂根皂苷纯品并在旋转蒸发器上蒸干、称重,确定其得率为19.19%。
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