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灵芝(Ganoderma lucidum)是一种重要的传统药用菌,人们对其活性成分,药理药效,深层发酵等方面进行了大量的研究工作。由于在实际生产中菌种的作用至关重要,因此,发掘和保护灵芝的种质资源是一项十分重要的工作。作者在紫金山考察发现野生灵芝,采用组织分离法分离出灵芝菌种,开展了基于ITS序列的分子鉴定并构建灵芝系统发育树;研究了灵芝菌丝体发酵并测试了几种胞外酶的活性;对灵芝菌丝体发酵液多糖的免疫学试验表明,菌丝体多糖具有很高的体外免疫活性。主要研究内容及结果如下: 紫金山灵芝的菌种分离与鉴定:通过子实体形态观察,担孢子扫描电镜观察,初步确认在紫金山发现灵芝。通过组织分离法获得灵芝菌种,提取子实体和菌丝体的DNA并进行ITS序列的扩增比对,结果表明,菌丝体与子实体的ITS序列相似度为100%,可以确认所分离菌种来自紫金山灵芝子实体。用该菌的ITS序列与GeneBank中相关ITS序列构建系统发育树,发现紫金山灵芝与GeneBank中灵芝AF506371置信度为99%,进一步说明所分离灵芝菌种的可靠性。 灵芝菌丝体发酵研究:开展了灵芝菌丝体液体发酵所需碳源及氮源的筛选试验,结果表明玉米粉为最佳碳源,黄豆粉为最佳氮源,在此基础上所进行的正交试验进一步确定了菌丝体发酵的最佳试验条件,探讨了培养基pH,装液量等因素对发酵的影响。结果表明,pH值为5.8,装液量为50mL,接种量为10%时,菌丝体生物量最大。 灵芝多糖的体外免疫试验:提取灵芝菌丝体多糖并进行了灵芝多糖对小鼠体外免疫细胞活性影响的研究,结果表明,灵芝多糖能增强腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力,增强腹腔巨噬细胞杀伤肿瘤细胞能力,促进胸腺和脾脏淋巴细胞增殖,说明采用紫金山灵芝菌种发酵得到的灵芝多糖具有提高小鼠的免疫力的作用。 紫金山灵芝菌丝体的几种胞外酶活性研究:发酵过程中几种胞外多糖水解酶的研究表明,在菌丝体发酵期间,淀粉酶比其他两种酶较早地出现酶活高峰,而CMC酶,木聚糖酶的情况则不同,它们的酶活高峰出现的较晚或者酶活性变化较小。对灵芝菌丝体所产漆酶的研究结果表明,灵芝漆酶活性在酸性范围表现出较广适应性,其中pH值范围在4.6-7.0时酶活性较高,pH值为6.4时酶活性最高。