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实验目的探讨HMGB1基因第4内含子1176位点G/C基因多态性与HBV感染后肝癌之间的关系，以利于更深入的了解乙肝后肝癌的发病机理及预后，为乙肝患者个体化治疗提供有力的科学依据，预测人体感染乙肝病毒后的临床转归，为乙肝肝癌的早期预防，早期监测及临床治疗工作提供新方向。实验方法第一部分：收集10例山西医科大学第一附属医院乙肝肝癌患者静脉血标本各5ml，分别采用改良盐析法和DNA提取试剂盒法（硅胶柱纯化）提取基因组DNA，利用UV计读取DNA在260nm、280nm处波长的吸光度值，根据公式计算各自DNA浓度及纯度，利用配对样本t检验的统计学方法进行组间分析，行PCR扩增及2%琼脂糖凝胶电泳，比较两种方法的抽提效果，为后续实验寻求合适的实验方法。第二部分：收集2012.4-2013.11期间就诊于山西医科大学第一附属医院的426例HBV感染者静脉血标本2ml，采用硅胶柱纯化法提取基因组DNA。将DNA样本稀释至10ng/μl分装。从NCBI数据库下载本实验所需的SNP标准序列，采用Primer Premier6.0软件设计实验引物。运用PCR-RFLP方法检测110例HBV感染后肝癌患者及316例HBV感染后非肝癌患者（其中乙肝携带组98例，慢性乙型肝炎组116例，乙肝肝硬化组102例，轻型肝病组214例，中重度肝病组218例）HMGB11176G/C位点多态性，直接计算法计算基因频率及基因型频率，利用χ2检验分析组间差异，非条件logistic回归统计学方法分析其相关性。实验结果第一部分：运用UV计测量两种方法抽提所得DNA的A260、A280及A260/A280。将两组DNA浓度和纯度进行比较，结果显示利用改良盐析法所得DNA浓度明显高于硅胶柱提取法，比较有明显的统计学差异（P<0.001），95%CI（16.57-25.67）；硅胶柱提取法所得DNA吸光度比值高于改良盐析法，差异有统计学意义（P=0.042），95%CI（0.01-0.32）。两种方法所获PCR扩增片段均与预计片段大小一致，其中改良盐析法所获PCR产物宽厚、明亮，但拖带现象明显；试剂盒提取法所获PCR条带均一、细小、暗淡，但无拖尾现象。前者提取DNA浓度高，PCR条带亮度佳，但DNA杂质多，操作步骤耗时长；后者提取DNA纯度高，但实验操作步骤多且琐碎，有较多重复，同时所获得DNA量少。第二部分：HMGB1基因第4内含子1176位点3种基因型及G、C等位基因频率在样本群体中的分布无明显差异，HCC组GG、CC基因型频率与CHB组、轻型肝病组、非肝癌组的比较有统计学差异（χ2=6.152，P=0.046；χ2=8.269，P=0.016；χ2=7.143，P=0.028）。HCC组G、C等位基因频率与CHB组、轻型肝病组、中重度肝病组、非肝癌组的比较有统计学差异（χ2=5.605，P=0.018；χ2=5.128，P=0.024；χ2=5.752，P=0.016；χ2=5.428，P=0.02）。在显性模式下HCC组与CHB组的比较有统计学差异（P=0.023，OR=3.792），在隐性模式下与AsC组、轻型肝病组的差异有统计学意义（P=0.048，OR=0.301；P=0.028，OR=0.227），在共显性模式下与轻型肝病组的比较有统计学差异（P=0.03，OR=0.225）。实验结论根据本实验的研究需求及所具备的条件综合考虑后选择硅胶柱纯化法提取外周血DNA。HMGB11176G/C多态性与HBV感染后肝癌的发生有关联，其中携带GG基因型的人群对HBV感染后肝癌的患病风险增加，该慢性乙型肝炎人群更易发展成乙肝肝癌，而携带CC基因型的人群感染HBV后发生肝癌的患病风险较低。G等位基因不仅与HBV感染严重肝病密切相关，而且与HBV感染后肝癌的发生呈正相关。