流感病毒属于正黏病毒科流感病毒属,是重要的人畜共患病原,也是造成季节性流感暴发和周期性流感大流行的元凶,给畜牧业的发展和人类公共卫生带来了巨大危害。本研究根据流感病毒不同亚型的多种蛋白（PB2、PB1、PA和NP蛋白）的基因序列分析,制备筛选广谱型、多应用性单克隆抗体,为流感病毒防控研究以及流感病毒检测、诊断提供一定的应用支持。对PB2、PB1、PA和NP蛋白进行序列分析,分别选取两段（PB2-1、PB2-2、PB1-1、PB1-2、PA-1、PA-2以及NP-1、NP-2）同源性高、免疫原性好的序列为模板制备免疫原免疫小鼠,经细胞融合试验后用间接ELISA和免疫印迹筛选得到46株阳性杂交瘤细胞株,并鉴定各单克隆抗体的亚型。最后通过免疫印迹筛选出9株具有广谱性、敏感性高的单克隆抗体:分别为PB2单克隆抗体8A5、2C4,PB1单克隆抗体7H11、1B7,PA单克隆抗体9A8、9E9、10E11,NP单克隆抗体10E9、3F3。通过氨基酸定点突变技术和肽扫描等试验对筛选出的9株单克隆抗体的抗原表位进行分析。结果表明:8A5、2C4、7H11、1B7、9A8、9E9和10E11单克隆抗体的抗原表位关键区域分别在₃₇GRQEKNPALRMKWMM₅₁、₆₆₉GKDAGPLTEDPDEGTAGVESA₆₈₉、₂₂FPYTGDPPYSHGTGT₃₆、₆₈₇QMYQKCCNLFEKF₆₉₉、₁₉₆RGEETIEERF₂₀₅和₆₇₁ALRDNLEPGTFDLGGLYEAI₆₉₀;10E9和3F3单克隆抗体的抗原表位关键位点分别在₈₄SAGKDP₈₉和₃₂₀ENPAH₃₂₄。通过免疫共沉淀试验、激光共聚焦试验分析这9株单克隆抗体的应用性,结果表明:8A5、2C4、7H11、1B7、9A8、9E9、10E11、10E9和3F3均能良好的应用于免疫共沉淀;根据激光共聚焦试验结果分析:8A5、2C4、7H11、10E9均能应用于激光共聚焦试验,而1B7、9A8、9E9、10E11、3F3均有非特异现象存在。为了建立高效、快速的检测流感病毒的诊断技术,将以上筛选到的两株抗体亚型均为IgG2a的NP单克隆抗体10E9和3F3进行腹水纯化。用20nm的胶体金颗粒对单克隆抗体3F3进行标记,将单克隆抗体10E9和羊抗鼠二抗分别喷涂于检测线和质控线,利用免疫层析技术原理,研制了能快速检测流感病毒的胶体金免疫层析试纸条。