Runx转录因子家族在多细胞生物的发育中发挥着重要的调控作用，哺乳动物中有3个Runx转录因子:Runx1，Runx2和Runx3，它们在干细胞维持、增殖分化和骨形成中发挥重要作用。昆虫中，Runx家族研究也取得一定的进展，果蝇中有4个Runx基因，分别是run、lozenge、 CG34145和CG42267，其中run在性别决定和神经形成中扮演重要角色;lozenge在触角和眼睛的生成中起着至关重要的作用，并且与GATA因子Srp(Serpent)以及Gcm(Glial cell missing)在果蝇胚胎时期造血作用中共同调控结晶细胞的形成。　　家蚕作为鳞翅目昆虫的代表，随着其基因组图谱绘制的完成，已经逐步成为基因功能研究的理想模型。家蚕有五种血细胞类型，但各种血细胞在体内的形成过程及其调控机制仍不清楚。本论文基于家蚕基因组数据库，对家蚕Runx转录因子家族进行克隆和鉴定，并对其表达情况进行分析。最后重点对Bmlozenge(BGIBMGA008908)进行进一步的研究，揭示其在血细胞免疫反应，特别是黑化反应的功能。主要研究结果如下:　　1.家蚕BmRunx家族的鉴定　　利用家蚕基因组数据库，对BmRunx家族进行分析和鉴定，发现有3个BmRunx基因家族成员。利用RACE技术，获得其完整的cDNA序列。该基因家族定位于3号染色体，具有典型的Runt结构域。对昆虫Runx家族序列进行聚类分析结果显示，Runx家族共聚为4类，分别是run、lozenge、CG34145和CG42267。BmRunx家族三个基因BGIBMGA008906(Bm8906)、BGIBMGA008908(Bm8908)和BGIBMGA008970(Bm8970)分别属于run、lozenge和CG34145。　　2.家蚕BmRunx家族的表达分析　　利用PCR技术检测BmRunx家族在胚胎时期的表达情况，结果显示Bm8906和Bm8908主要表达于胚胎1天和2天，而Bm8970主要在家蚕的胚胎4天和5天高表达。BmRunx家族成员表达模式的差异表明各成员可能扮演着不同的角色。家蚕5龄3天芯片数据及各组织表达分析结果显示，Bm8906和Bm8970分别高表达于卵巢和精巢，而Bm8908主要在血液和翅原基（造血器官）中表达。暗示Bm8908可能在造血作用中扮演着重要的调控功能。聚类分析结果显示，Bm8908和果蝇lozenge聚为一类，具有很高的同源性，而果蝇lozenge主要调控结晶细胞的分化。综上所述，推测Bm8908在结晶细胞的分化中发挥着重要的作用。对Bm8908(Bmlozenge)的鉴定、克隆和表达分析，为其在造血调控中的功能研究奠定基础。　　3.家蚕Bmlozenge抗体的制备　　Bmlozenge(Bm8908)的ORF为1305bp，编码434aa的蛋白，预测蛋白的等电点6.27，分子量48.3KDa。通过家蚕数据库比对，选取Bmlozenge编码框中较为特异231aa长度的片段，原核表达，纯化蛋白，免疫小鼠制备免疫血清，最终获得了Bmlozenge小鼠多克隆抗体。ELISA检测其效价为1∶20000，Western blotting检测获得的条带大小约为50KDa，与Bmlozenge预测的蛋白分子量一致。免疫荧光显示其在循环血液部分细胞中表达，与DAPI共染发现其主要位于细胞核。　　4.家蚕Bmlozenge的RNAi　　通过RT-PCR检测家蚕Bmlozenge在血液各时期的表达情况，结果显示Bmlozenge主要在家蚕盛食期高量表达，特别是4龄3天和5龄3天。利用T7体外转录试剂盒，成功合成Bmlozenge的RNAi双链。5龄1天注射家蚕体内，72h取血观察血液黑化速率，并收集血细胞提取RNA，RT-PCR检测Bmlozenge的表达，结果显示Bmlozenge下调后黑化速度变缓。RNAi结果表明Bmlozenge可能参与家蚕免疫反应，尤其是黑化途径，推测Bmlozenge可能与拟绛色细胞的发育相关。　　5.家蚕Bmlozenge在果蝇S2细胞系和蚕体过表达　　成功构建Bmlozenge过表达载体。首先在体外果蝇S2细胞系中过表达Bmlozenge。结果显示Bmlozenge过表达后，果蝇黑化效应因子ppo1、ppo2和ppo3都显著上调。表明Bmlozenge可以启动果蝇ppo的表达。在家蚕体内过表达Bmlozenge后，家蚕血液黑化速度加快，黑化效应因子ppo1和它的上游激酶baee和paee表达量升高，表明家蚕Bmlozenge因子与黑化作用相关，推测Bmlozenge是通过调控拟绛色来实现这一变化的。这与果蝇S2细胞中情况一致。总之，以上实验说明Bmlozenge因子参与调控家蚕黑化反应，推测其可能调控家蚕拟绛色细胞的形成。